Period1、Period2调控鼠胶质瘤细胞生物节律性及择时放疗应用的体内研究

摘要

目的：在体内研究生物钟基因 Period1(Per1)、Period2（Per2）对鼠胶质瘤和正常脑组织细胞中的表达节律及在不同时间段对胶质瘤细胞的放疗调控作用，观察在 Per1、Per2不同时间段放疗后对胶质瘤和正常脑组织细胞的增殖及凋亡能力的影响。
　　方法：将体外培养的胶质瘤 C6细胞接种于 SD大鼠右侧的尾状核区，建立SD大鼠的胶质瘤动物模型。建好的胶质瘤动物模型在12h光照/12h黑暗的光暗条件下饲养3周，建立大鼠的生物节律模型。
　　将建好的SD大鼠生物节律模型分别在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同时段处死，取右侧的胶质瘤组织和对侧的正常脑组织标记后迅速放于液氮中保存。应用Real-timePCR在转录水平上定量观察大鼠脑胶质瘤细胞和正常脑组织细胞 Per1、Per2mRNA的及肿瘤组织 Per1、Per2蛋白表达情况。
　　利用直线加速器，在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同时段对建好的SD大鼠的节律模型进行照射，利用PCNA免疫组化技术检测不同时间点胶质瘤细胞及正常脑组织细胞的增殖情况，同时利用激光共聚焦技术检测胶质瘤细胞及正常脑组织细胞的凋亡情况。
　　结果：Per1、Per2基因在脑胶质瘤及正常脑组织中都呈现出明显的节律性。在胶质瘤细胞中，Per1、Per2的振荡节律约为12小时，在这种节律表达中Per1的表达峰值在 ZT4，ZT16，谷值在 ZT12，ZT24，其中最高点在 ZT4，最低点在 ZT24；Per2的表达峰值在 ZT12，ZT24，谷值在 ZT8，ZT20，其中最高点在 ZT24，最低点在 ZT20；在正常脑组织细胞中，Per1、 Per2的振荡节律约为24小时，在这种节律表达中Per1的表达峰值在 ZT8，谷值在 ZT24，其中最高点在 ZT8，最低点在 ZT24；Per2的表达峰值在 ZT12，谷值在 ZT24，其中最高点在 ZT12，最低点在 ZT24。肿瘤组织24h蛋白表达也显示出与 mRNA表达相接近结果，也呈现出12h的节律表达。
　　放疗后利用PCNA检测增殖情况显示，在胶质瘤组织细胞中，Per1在其高表达及低表达时间点细胞的增值能力没有显著差异，在此时间点的正常脑组织细胞的增值能力无显著差异；在胶质瘤组织细胞中，Per2高表达时间点肿瘤细胞的增殖能力明显低于其低表达时间点，同时在此时间点的正常脑组织细胞的增值能力无显著差异。
　　放疗后利用Tunel法检测胶质瘤细胞及正常脑组织细胞的凋亡情况，胶质瘤组织细胞中，Per1在其高表达和低表达时间点肿瘤细胞的凋亡无显著差异，在此时间点的正常脑组织细胞凋亡无显著差异；Per2在其高表达时间点肿瘤细胞的凋亡明显高于其低表达时间点，而此时间点的正常脑组织细胞凋亡无显著差异。
　　结论：本实验证实了Per1、Per2基因在大鼠体内胶质瘤细胞中的表达节律为12小时，正常组织中的表达节律为24小时。肿瘤组织中高表达的Per基因能够诱导肿瘤细胞对电离辐射的敏感性，抑制肿瘤组织细胞的的增值，促进肿瘤组织的凋亡。同时也初步摸索了胶质瘤对射线的敏感节律性，为胶质瘤时间治疗在放射治疗上的运用提供了理论依据，为胶质瘤的综合治疗提出了一个全新的思路。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

前言

实验材料及方法

1. 实验材料

2.实验方法

结果

1．Real-timePCR结果：

2. Per蛋白的免疫组织化学结果

3. PCNA 法检测肿瘤及正常组织细胞的增殖结果

附图

讨论

结论

参考文献

综述Period1 Period2 对胶质瘤细胞生物节律性的放疗敏感性研究

参考文献

致谢

研究生期间发表的论文