黄芪注射液和黄芪甲苷对大鼠脑出血后出血灶周围凋亡神经元的作用研究

摘要

目的：观察黄芪注射液和黄芪甲苷对大鼠脑出血后出血灶周围神经元凋亡的作用，探讨脑出血后神经元凋亡的规律及可能的凋亡通路，以期为黄芪注射液以及黄芪甲苷应用于临床脑出血的治疗提供理论依据和实验依据。
　　方法：清洁级健康成年SD大鼠140只，雌雄不限，体重300±50 g。大鼠随机分为正常组（n=20）、模型组（n=40）和治疗组（n=80）。模型组分为3 d模型组（n=20）和7 d模型组（n=20）；治疗组分为黄芪注射液3 d治疗组（n=20）、黄芪注射液7 d治疗组（n=20）、黄芪甲苷3 d治疗组（n=20）、黄芪甲苷7 d治疗组（n=20）。应用脑立体定位仪于大鼠尾壳核注入肝素化VII型胶原酶建立脑出血模型。治疗组大鼠于脑出血模型制作成功后6 h开始腹腔注射黄芪注射液或黄芪甲苷进行干预，继之每隔24 h注射一次。模型组每日经腹腔注入相应量的生理盐水。分别对各组大鼠进行神经行为学评分，尼氏染色，吉姆萨（Giemsa）染色，免疫组织化学染色，脑组织含水量测定及蛋白免疫印迹（Western Blot）等实验观察。
　　结果：①大鼠神经行为学评分：黄芪注射液治疗组和黄芪甲苷治疗组均能有效降低脑出血大鼠的神经功能缺损评分（P<0.05）；黄芪注射液和黄芪甲苷治疗脑出血大鼠7 d时其神经行为学改善情况要优于相应的3 d治疗组（P<0.05）。②大鼠脑出血后脑组织含水量：大鼠脑出血后各模型组脑组织含水量较正常组明显增加（P<0.05）；黄芪注射液及黄芪甲苷各时间段治疗组大鼠脑组织含水量与其相应的模型组比较均明显减小（P<0.05）；黄芪注射液各治疗组大鼠脑组织含水量与黄芪甲苷治疗组比较均明显减小（P<0.05）；7 d黄芪注射液治疗组及7 d黄芪甲苷治疗组大鼠脑组织含水量与各自的3 d治疗组比较均明显减小（P<0.05）；黄芪注射液7 d治疗组大鼠脑含水量已接近正常大鼠脑组织含水量。③大鼠脑组织尼氏染色：正常神经元尼氏体较大、数量较多、染色较深，病变轻的神经元尼氏体变小、数量变少、染色浅淡，病变较重的神经元尼氏体数量更少。④大鼠脑组织Giemsa染色：各治疗组脑出血灶周围神经元凋亡数量及程度均较模型组降低。⑤大鼠脑组织免疫组化染色：Bcl-2、Bax及Caspase-3在正常脑组织中仅有少量表达，并且 Bcl-2/ Bax的值接近于1。与相应模型组比较，各药物治疗组 Bcl-2的阳性表达均明显升高（P<0.05），而Bax及Caspase-3的阳性表达均显著降低（P<0.05）。与3 d黄芪甲苷治疗组相比，3 d黄芪注射液治疗组Bcl-2的阳性表达明显升高（P<0.05）， Bax及Caspase-3的阳性表达明显降低（P<0.05）。与7 d黄芪甲苷治疗组相比，7 d黄芪注射液治疗组Bcl-2的阳性表达明显升高（P<0.05），Bax及Caspase-3的阳性表达明显降低（P<0.05）。与3 d黄芪注射液治疗组相比，7 d黄芪注射液治疗组Bcl-2的阳性表达明显升高（P<0.05），Bax及Caspase-3的阳性表达明显降低（P<0.05）。与3 d黄芪甲苷治疗组相比，7 d黄芪甲苷治疗组Bcl-2的阳性表达明显升高（P<0.05），Bax及Caspase-3的阳性表达明显降低（P<0.05）。⑥大鼠脑组织蛋白免疫印迹：正常组大鼠脑组织内Bax、Bcl-2以及Caspase-3均有少量表达。与正常组相比，各模型组大鼠脑组织内Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达均有不同程度的增加（P<0.05），尤以Bax和Caspase-3表达增加明显。与相应模型组比较，各药物治疗组Bcl-2蛋白的表达均明显增加（P<0.05），同时伴随Bax和Caspase-3蛋白的表达均明显减少（P<0.05）。各药物7 d治疗组与相应3 d治疗组Bcl-2蛋白的表达增加更为明显（P<0.05），同时Bax和Caspase-3蛋白的表达明显减少（P<0.05）。黄芪注射液各时间段治疗组Bcl-2蛋白的表达与黄芪甲苷各时间段治疗组相比明显增加（P<0.05），同时伴随Bax和Caspase-3蛋白的表达明显降低（P<0.05）。
　　结论：①黄芪注射液和黄芪甲苷均能促进脑出血大鼠神经功能缺损的恢复，均能不同程度的促进大鼠脑出血后脑水肿的吸收。②黄芪注射液和黄芪甲苷均能不同程度的降低大鼠脑出血灶周围的神经细胞凋亡。黄芪注射液抑制出血灶周围神经元凋亡的作用较黄芪甲苷明显。

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前 言

材料与方法

1 实验动物

2 实验动物分组及药物剂量确定

3 主要实验试剂和仪器

4 主要溶液的配制

5 大鼠脑出血模型的建立

6 大鼠神经行为学评分

7 取材

8 大鼠脑组织含水量测定

结 果

1 大鼠神经行为学评分

2 大鼠脑组织含水量测定

3 尼氏染色

4 Giemsa染色结果

5 免疫组化染色结果

6 Western Blot检测结果

讨 论

1 脑出血疾病概述

2 祖国医学对脑出血的认识

3 益气活血法治疗脑出血的理论基础

4 黄芪与黄芪甲苷

5 大鼠神经功能缺损的修复（行为学检测）

6 大鼠脑组织含水量

7 免疫组化检测Bax、Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白

8 Western Blot检测凋亡蛋白表达

结 论

附 图

参考文献

中医诊治出血中风进展

1 中医中风理论

2 中风诊断

3 中医治疗出血中风

4 结语

参考文献

临床脑出血治疗进展

1 脑出血的临床表现及诊断要点

2 临床常用监测指标

3 脑出血的临床治疗

4 结语

综述（二）参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文