传染性法氏囊病病毒山东株的分离鉴定及其鸡胚毒的免疫效果

摘要

传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病。该病除直接引起鸡死亡和生产性能下降外，还可导致感染鸡免疫抑制。特别是变异株IBDV、超强毒株IBDV的出现，它们能够突破母源抗体的保护，引起高母源抗体的雏鸡发病并且有发病日龄提前的趋势。本课题共进行了以下4个试验：试验1，从山东省某疑似感染IBDV的鸡场分离到1株IBDV野毒，并就其对SPF鸡的致病性进行了研究。结果表明毒株致病性较强。试验2，对IBDV SD0306的VP2基因高变区进行了克隆与序列分析。利用Trizol试剂提取IBDV的核酸后，再以IBDV特异性引物，通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增，得到分离株IBDV VP2基因高变区的cDNA，构建了VP2基因高变区的重组质粒，将VP2基因高变区成功地克隆进pMD18-T载体中。试验3，对IBDV SD 0306第11代鸡胚传代毒、第15代鸡胚传代毒进行了致病性的研究及VP2高变区基因序列的测定。结果表明这两代鸡胚传代毒没有引起明显的临床症状；VP2高变区的序列测定结果表明，两者的核苷酸序列没有变化。试验4，分别在7日龄和14日龄以E15按照60EID50、300EID50接种普通商品代雏鸡，同商品苗B87进行免疫保护效果的比较。结果表明，15代鸡胚毒没有引起普通商品代雏鸡发病，但是会引起法氏囊中的淋巴细胞轻微的病变。

目录

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缩略语英汉对照表

引言

1.1概述

1.2 IBDV的病原特性

1.3流行病学

1.3.1自然宿主

1.3.2传播媒介

1.3.3潜伏期和症状

1.3.4发病率和死亡率

1.4血清型

1.5 IBDV的抵抗力

1.6致病机理

1.7免疫抑制

1.8 VP2蛋白及其功能

1.9 IBDV的变异

1.10诊断

1.11预防与控制

试验一IBDV野毒株的分离鉴定

1材料和方法

1.1 IBDV原始病料

1.2 IBDV琼脂免疫扩散试验(AGID)标准抗原及血清

1.3 SPF鸡胚和SPF鸡

1.4免疫胶体金试纸膜

1.5病毒的处理

1.6病毒的分离

1.7琼脂免疫扩散试验

1.8免疫胶体金试纸膜检测IBDV

1.9分离株致病性的测定

1.10病理组织学观察

2结果

2.1发病鸡的临床症状及流行病学

2.2病毒分离结果

2.3琼脂扩散试验

2.4免疫胶体金试纸膜检测结果

2.5动物回归试验结果

2.6组织病理学观察

3讨论

实验二IBDV SD0306 VP2基因高变区的克隆与序列分析

1材料

1.1病毒

1.2菌种

1.3试剂

1.4溶液配制

2方法

2.1野毒株原代毒核酸RNA的提取

2.2 VP2高变区的扩增

2.3 PCR产物的回收

2.4 VP2高变区的克隆与鉴定

2.5重组质粒的提取与鉴定

2.6阳性质粒测序与序列分析

3结果

3.1 RT-PCR结果

3.2目的基因的克隆和测序

3讨论

试验三IBDV SD0306在SPF鸡胚上的传代致弱

1材料和方法

1.1病毒

1.2 SPF鸡胚和SPF鸡

1.3克隆与测序试剂及受体菌

1.4 IBDV SD0306在SPF在鸡胚上的传代

1.5 E11及E15 EID50的测定

1.6鸡胚毒回归SPF鸡试验

1.7鸡胚毒VP2高变区的克隆与序列分析

2结果

2.1 IBDV SD0306在SPF鸡胚上的增殖

2.2 E11、E15鸡胚的EID50

2.3动物回归试验

2.4 IBDV SD0306鸡胚毒VP2基因高变区的序列分析结果

3讨论

试验四IBDV鸡胚毒免疫效果的研究

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验分组

1.3母源抗体水平和免疫后抗体效价的检测

1.4计算免疫器官指数及观察病理组织切片

1.5人工感染用毒株及攻毒途径

1.6统计学分析

2结果

2.1母源抗体水平与免疫后的IBDV抗体效价

2.2疫苗免疫后对免疫器官的影响

2.3 NDV抗体水平的检测结果

2.4 E15对攻毒的免疫保护作用

3讨论

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况

附图