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1文献综述
1.1 马立克氏病病毒(MDV)研究进展
1.1.1病原学
1.1.2流行病学
1.1.3发病机理及病理变化
1.1.4诊断技术
1.1.5疾病防制策略
1.2马立克氏病病毒的致病型
1.3马立克氏病病毒的基因组结构
1.4禽反转录病毒与DNA病毒间的基因重组
1.4.1病毒的变异方式
1.4.2 MDV与REV间的基因重组
1.4.3 MDV与ALV间的基因重组
1.4.4禽反转录病毒与DNA病毒间的基因重组的发生机制
1.5不同病毒间遗传重组的流行病学意义
1.6 DNA片段克隆的载体系统
1.6.1质粒
1.6.2粘粒
1.6.3 BAC的优势及其发展
1.7操纵MDV基因:依靠细菌人工染色体新技术
1.7.1 RecA蛋白介导的同源重组
1.7.2 RecE/T蛋白介导的同源重组
1.8本研究的意义
2试验一 一株整合有REV长末端重复序列的MDV的致病性研究
2.1材料和方法
2.1.1 材料
2.1.2方法
2.2结果与分析
2.2.1 GX0101毒株感染对鸡生长性能的影响
2.2.2 GX0101毒株感染对NDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
2.2.3 GX0101毒株感染对AIV-H5疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
2.2.4 GX0101毒株感染对AIV-H9疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
2.2.5 GX0101毒株感染后对中枢免疫器官的影响
2.2.6接种MDV的鸡的死亡率及肿瘤发生率
2.3讨论
3试验二 带有REV-LTR片段的MDV野毒株GX0101的BAC克隆的构建及拯救病毒的致病性分析
3.1材料与方法
3.1.1材料
3.1.2方法
3.2结果与分析
3.2.1质粒pDS-pHAI-US2
3.2.2 GX0101-BAC克隆的鉴定
3.2.3拯救的重组病毒的鉴定
3.2.4IFA检测重组病毒bac-GX0101
3.2.5 对增重的影响
3.2.6对NDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
3.2.7对AIV-H5疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
3.2.8对AIV-H9疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
3.2.9致肿瘤性及死亡率
3.2.10 GX0101、bac-GX0101株感染对SPF鸡的病理组织学检测
3.3讨论
4试验三 马立克氏病病毒野毒株GX0101的LTR序列敲除及其生物学特性比较
4.1材料与方法
4.1.1材料
4.1.2方法
4.2 结果
4.2.1卡那霉素的特异性扩增
4.2.2敲除GX0101株中整合的REV-LTR序列
4.2.3 PCR产物的序列测定与分析
4.2.4拯救病毒bac-GX0101ALTR.
4.2.5对增重的影响
4.2.6对NDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
4.2.7对AIV-H9疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
4.2.8间接免疫荧光法(IFA)检测MDV病毒血症水平
4.2.9 MDV-pp38核酸探针灵敏度及特异性检测
4.2.10斑点分子杂交检测感染鸡的羽毛囊中的MDV
4.2.11 bac-GX0101毒株与bac-GX0101△LTR毒株横向传播能力的比较
4.2.12两株MDV诱发鸡的死亡率及肿瘤发生率的比较
4.3讨论
5试验四 马立克氏病病毒ICP4基因功能的研究
5.1材料与方法
5.1.1材料
5.1.2方法
5.2结果与分析
5.2.1敲除MDV毒株中的ICP4基因
5.2.2 PCR产物的序列测定与分析
5.2.3拯救bac-GX0101△ICP4
5.2.4 IFA
5.2.5对增重的影响
5.2.6对NDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
5.2.7对AIV-H5疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
5.2.8对AIV-H9疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
5.2.9致死率与致肿瘤性
5.3讨论
6试验五 马立克氏病毒1.8-kb mRNA中潜在阅读框的功能研究及与致病性的关系
6.1材料与方法
6.1.1材料
6.1.2方法
6.2 结果
6.2.1 1.8kb-mRNA中ORF(A+C)缺失株的构建
6.2.2 BAC克隆缺失株的蚀斑形态与生长速度测定
6.2.3 1.8kb-mRNA中ORF(A+C)对双向启动子的活性影响
6.2.4对增重的影响
6.2.5对NDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
6.2.6对AIV-H5疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
6.2.7对AIV-H9疫苗免疫后抗体反应的抑制作用
6.2.8致肿瘤性
6.3讨论
结论
创新之处
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表、录用(或起草)论文