山羊发情周期中输卵管内FSHR的定位及其mRNA表达规律的研究

摘要

自1972年Means首次报道了FSHR在睾丸组织中有表达以来，FSHR基因的研究一直为国内外学者所关注。近年来的研究发现，FSHR不仅存在于卵巢和睾丸等性腺器官，在哺乳动物的输卵管、子宫、胰腺、胃的壁细胞、下颌腺等非性腺组织中也有表达。这表明FSHR对输卵管、子宫等生殖管道的生理机能也具有重要的调节作用。目前，国内外关于输卵管中FSHR mRNA的研究，除了Zheng（1996）采用RT-PCR方法证明在人的输卵管中有表达外，在其它动物则鲜有报道。济宁青山羊为我国优异的山羊品种，其繁殖率高达293.7％，为此，我们以济宁青山羊为研究对象，采用实时荧光定量PCR技术，研究了山羊发情周期不同阶段输卵管中FSHRmRNA的表达量的差异；运用免疫组织化学方法研究了济宁青山羊发情周期不同阶段FSHR在输卵管不同部位中的位置分布。主要结果如下：
　　 一、发情周期不同阶段输卵管各部位中均有FSHR基因的表达，但不同阶段输卵管漏斗部、壶腹部和峡部三个部位之间的表达量各不相同。在输卵管漏斗部，间情期的相对表达量最高，但与其它三个时期差异不显著（p>0.05）；输卵管壶腹部也是在间情期的相对表达量最高，在发情前期的相对表达量最低，间情期与发情前期差异极显著（P<0.01），与发情期差异显著（P<0.05）；在输卵管峡部，发情后期的相对表达量最高，发情前期的相对表达量最低，发情后期与其它三个时期均达显著水平（P<0.05）。
　　 二、FSHR阳性物质存在于发情周期不同阶段的输卵管各部位中，且主要存在于输卵管的黏膜上皮细胞和固有层细胞中。

目录

文摘

英文文摘

符号说明及缩略词

1 引言

1.1 卵泡刺激素

1.1.1 FSH的生理功能

1.1.2 FSH的分泌与动物繁殖力的关系

1.2 卵泡刺激素受体

1.2.1 FSHR在输卵管中的分布

1.2.2 FSHR在卵巢中的分布

1.2.3 FSHR在睾丸中的分布

1.2.4 FSHR在其他组织中的分布

1.3 FSHR功能

1.3.1 受体糖基化作用

1.3.2 受体脱敏

1.3.3 受体活化后的事件

1.3.4 信号转导

1.4 输卵管

1.4.1 输卵管的组织结构及其功能

1.4.2 激素与输卵管功能的关系

1.4.3 与输卵管功能相关的其他研究

1.5 实时荧光定量PCR

1.6 济宁青山羊

1.7 本研究目的和意义

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 试验动物

2.1.2 试验地点

2.1.3 主要试剂和其他试验用品

2.2 试验方法

2.2.1 总RNA的提取

2.2.2 RNA质量的鉴定

2.2.3 引物设计及RT-PCR扩增

2.3 免疫组织化学方法

2.3.1 切片标本制备

2.3.2 HE法染色

2.3.3 免疫组织化学SABC方法

2.3.4 对照试验

2.3.5 Image pro-plus 4.5图像分析

3 结果与分析

3.1 济宁青山羊总RNA提取的完整性及纯度检测

3.2 RT-PCR产物检测

3.3 RT-PCR体系的优化

3.4 RT-PCR的标准曲线和熔解曲线

3.5 济宁青山羊发情周期中输卵管不同部位FSHR基因表达差异

3.5.1 FSHR基因在发情周期中输卵管同一部位的表达差异

3.5.2 FSHR基因在发情周期相同阶段输卵管不同部位的表达差异

3.6 免疫组织化学结果

3.6.1 发情周期中输卵管漏斗部FSHR免疫阳性细胞的分布

3.6.2 发情周期中输卵管壶腹部FSHR免疫阳性细胞的分布

3.6.3 发情周期中输卵管峡部FSHR免疫阳性细胞的分布

3.7 发情周期中输卵管的上皮高度及其粘膜上皮腔面的小球状突起

4 讨论

4.1 济宁青山羊输卵管FSHR mRNA表达水平与其功能之间的关系

4.2 FSHR免疫阳性细胞在输卵管中分布特点、数量变化趋势及与FSHR mRNA表达量差异变化较

4.3 FSH与输卵管FSHR mRNA表达水平之间的关系

4.4 发情周期不同阶段输卵管的组织形态变化

4.5 输卵管黏膜上皮的腔面的“突起”现象

5 结论

6 参考文献

7 附录

8 致谢

9 个人简介及攻读学位期间论文发表情况