HP-PRRSV感染妊娠母猪病理模型建立及发病机制的研究

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征的病原。PRRSV感染可致妊娠后期母猪流产、早产和死胎，引起仔猪与育肥猪的呼吸道疾病。自2006年我国发生由PRRSV变异毒株引起的高致病性蓝耳病（HP-PRRSV）以来，该病给我国的养猪业造成了空前的损失。HP-PRRSV会造成更加严重的妊娠母猪死胎、流产现象，甚至患病母猪会急性死亡。
　　 本研究对不同妊娠时期的母猪(妊娠后30d、60d、90d)接种HP-PPRSV TA-12株，定期采取外周血，用ELISA方法检测外周血血清中PRRSV抗体以及细胞因子水平(IL-1、IL-2、IL-4等);同时采取抗凝血以检测血液中的主要血常规指标(MCH、LYM、WBC);定期剖杀实验猪采集各器官组织，Bouin's液固定，制作石蜡切片，HE染色以观察组织病理学变化;免疫组化染色以观察HP-PRRSV在各器官组织中的分布。以期探讨不同妊娠期母猪感染后的临床表现、血清抗体水平、细胞因子变化、病原分布与妊娠母猪死胎、流产的内在联系，建立HP-PRRSV感染妊娠母猪的病理模型，研究HP-PRRSV感染引起母猪繁殖障碍的发病机制。
　　 实验结果表明，HP-PRRSV TA-12株感染不同妊娠时期的母猪后，妊娠后期病情较重;病理变化主要见于肺、淋巴系统和生殖系统，其病理学变化的主要区别为子宫和输卵管的病变程度不同，妊娠后期病变较前中期严重。不同妊娠时期的母猪攻毒后3天均出现抗体阳性，妊娠早期14天就达峰值，妊娠前期的峰值大于中期，而中期的又大于后期。峰值持续到攻毒后3周。各实验组主要血常规指标无明显变化;各实验组HP-PRRSV在体内各组织器官中的分布高度一致，HP-PRRSV的组织嗜性与母猪妊娠的时期无关，除子宫外，HP-PRRSV在空怀母猪和怀孕母猪体内分布相同， TA-12株对母猪，尤其是妊娠母猪具有广泛的组织嗜性。不管是起正调控作用还是起负调控作用的细胞因子，攻毒后妊娠中、后期的母猪血清中的含量普遍降低，表明机体细胞免疫及非特异性免疫机能降低，这可能是PRRSV感染后造成免疫系统的损伤尤其是大量巨噬细胞感染，以致免疫功能紊乱的结果，也可能与母猪妊娠期间特殊复杂的免疫机制有关。本研究结果表明:HP-PRRSV引起妊娠母猪流产的原因很多且机制复杂，HP-PRRSV可直接侵嗜子宫，尤其表现在血管的炎症反应;细胞因子含量的普遍降低;肺脏病变及免疫机能受损，这些可能都是引起妊娠母猪流产的重要原因，但它们之间的内在联系及相互作用还需进一步研究探讨。

目录

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摘要

1 引言

1．1 猪繁殖与呼吸综合征研究进展

1．1．1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的基本结构及其生物学特性

1．1．2 PRRSV的遗传变异

1．1．3 PRRSV病毒的免疫学特点

1．2 PRRSV的致病机理

1．3 PRRSV的流行病学

1．4 病理变化

1．5 细胞因子

1．5．1 细胞因子的分类

1．5．2 细胞因子的作用特点

1．5．4 细胞因子的主要生物学作用

1．6 研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 主要试剂及仪器

2．2 主要试剂的配制

2．3 玻片的处理

2．4 病毒

2．5 实验动物

2．6 方法

2．6．1 实验方案

2．6．2 组织切片的制作

2．6．3 免疫组化染色步骤

2．6．4 HE染色步骤

2．6．5 血清PRRSV抗体的检测步骤(ELISA)

2．6．6 血清中各细胞因子的检测步骤(ELISA)

3 结果

3．1 临床表现

3．2 剖检变化

3．3 免疫组化检测PRRSV在妊娠母猪体内的分布

3．4 病理组织学变化

3．4．1 妊娠前期攻毒猪的病理变化

3．4．2 妊娠中期攻毒猪的病理变化

3．4．3 妊娠后期攻毒猪的病理变化

3．5 PRRSV抗体水平

3．6 血常规的变化分析

3．7 妊娠中、后期血清中细胞因子的变化

3．7．1 血清中IL-1含量的变化

3．7．2 血清中IL-2含量的变化

3．7．3 血清中IL-4含量的变化

3．7．4 血清中IL-6含量的变化

3．7．5 血清中IL-8含量的变化

3．7．6 血清中IL-10含量的变化

3．7．7 血清中IL-12含量的变化

3．7．8 血清中IL-18含量的变化

3．7．9 血清中IFN-γ含量的变化

3．7．10 血清中TNF含量的变化

3．7．11 血清中CRP含量的变化

3．7．12 血清中cyt-C含量的变化

3．7．13 血清中TGF-β1含量的变化

3．7．14 血清中TGF-β2含量的变化

3．7．15 血清中MIP-1α含量的变化

4 讨论

4．1 不同妊娠时期母猪的临床表现及病理变化

4．2 妊娠母猪的体内HP-PRRSV的病原分布

4．3 妊娠母猪细胞因子变化

5 结论

参考文献

致谢

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