大鼠嗅鞘细胞的纯化及活性检测

摘要

目的：1.采用改良差速贴壁联合胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞并检测嗅鞘细胞纯度。2.检测上述纯化方法所得嗅鞘细胞的生物活性。
　　方法：分离新生7d的SD大鼠嗅球嗅鞘细胞，分组后采用改良差速贴壁法联合不同时段（1min﹑3min﹑5min）胰酶消化法纯化培养，观察不同时段纯化的嗅鞘细胞的形态特点及生长情况；应用免疫荧光法检测细胞膜受体NGFRP75并评估细胞纯度；应用CCK-8法和酶联免疫吸附法分别检测嗅鞘细胞在纯化后3d-15d的增殖活性和分泌脑源性神经营养因子的含量。
　　结果：改良差速贴壁联合胰酶限时消化1min﹑3min﹑5min法所得嗅鞘细胞纯度分别为（57.52±2.13）％、（78.95±2.60）%、（49.01±0.74）%，组间两两比较有统计学意义（P＜0.05）；改良差速贴壁法联合胰酶限时消化1min﹑3min﹑5min法所得嗅鞘细胞在纯化后7d﹑9d﹑11d时的细胞数目和脑源性神经营养因子分泌量显示3min组最优，组间比较有统计学意义（F=4.944 P＜0.05）。
　　结论：1.改良差速贴壁（6h+18h）联合胰酶限时消化3min的纯化方法能获得较高纯度的嗅鞘细胞；2.通过该方法获得的嗅鞘细胞在纯化后7d-11d时处于细胞生长的对数期，此期内细胞增殖及分泌脑源性神经营养因子能力最强。

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前言

材料与方法

1.材料

2．方法

结果

1.各组OECs的不同生长时段的形态学观察

2.各组OECs的鉴定及纯度分析

3.各组OECs的增殖活性检测

4.各组OECs在不同时段BDNF的表达水平

讨论

1.影响OECs纯度的因素

2.改良差速贴壁联合胰酶限时消化法纯化大鼠OECs的可行性

3.检测OECs生物活性指标方法的选择

4.检测结果的分析

结论

问题与展望

1.OECs的来源问题

2.增强OECs生物活性的方法

3.OECs与载体的组织相容性

4.OECs移植入体内的实验研究

参考文献

综述

1.单一纯化方法作用后OECs纯度

2.多种纯化方法联合应用纯化OECs

3.结语

综述参考文献

致谢

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