山东省鸡传染性支气管炎病毒进化分析及IBV、NDV、H9亚型AIV三重荧光RT-PCR方法的建立

摘要

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，目前，鸡场主要依靠弱毒活疫苗来防治该病，但是由于种种原因IBV并未得到有效控制，经常发生免疫失败的情况，给养殖业带来了巨大经济损失。因此，开展IBV流行病学研究以及建立一种高效、快速、准确的诊断方法具有重要兽医指导意义。
　　2014-2015年，在山东各地送检的115份病料中，共分离鉴定了15份IBV，为了了解其变异情况，本研究选取了其中11株IBV，对其遗传变异情况展开分析，发现11株山东IBV分离株分属于两个基因型：QX基因型和H120基因型。其中10株属于QX基因型，说明QX基因型是山东目前流行的优势基因型。S1基因序列遗传进化分析发现，11个分离株与国内外参考株形成4个进化分枝，除SD1411-8 Y2，SD161 Y5属于以H120株为代表的进化分枝III中，其余9个毒株均属于以QXIBV为代表的进化分枝I中。M基因序列分析发现，其中10个分离株处于以QXIBV株为代表的进化分支Ⅰ，而分离株SD1411-8 Y2与疫苗株H120、Ma5等组成进化分支III。N基因的序列结果显示，11株分离株均处以QXIBV为代表的分枝I中。这说明S1基因突变要高于M，N基因，同时N基因较M基因保守。同时本研究结合3种主要毒力基因判断山东主要流行毒株，避免了单一毒力基因判定时造成的错误。
　　经临床症状表现和国内外相关资料显示，很多时候鸡场被鸡传染性支气管病毒感染时，也会伴有其它病原同时感染，比如新城疫病毒、禽流感病毒。为了能在短时间内快速有效的检测并区分出有相似症状的鸡传染性支气管炎病毒、新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒，本研究建立了一种三重荧光定量RT-PCR方法，此方法经多次实验证明可行，且在多种其他病原做对照实验时，能够特异性区分这三种病毒，有良好的特征性曲线，敏感性实验表明，该方法可以检测到10-5稀释度的阳性尿囊液。

目录

声明

符 号 说 明

前言

1.1鸡传染性支气管炎概述

1.2 IBV病原简介

1.3 IBV的变异机理

1.4 IBV的分型

1.5 IBV诊断方法

1.6 IB疫苗

1.7其他鸡呼吸道疾病的病原

1.8 实验目的和意义

2.1 材料

2.2 方法

3 结果与分析

3.1 病毒的分离与鉴定

3.2 IBV流行株序列的测定与遗传进化分析

3.3 IBV、NDV、AIV-H9三重荧光定量RT-PCR结果分析

4 讨论

4.1 山东省IBV流行株的分离鉴定

4.2 IBV流行株序列测定与遗传进化分析

4.3 IBV、NDV、AIV-H9三重荧光定量RT-PCR

5.结论

参考文献

致谢

作者简介及论文成果情况