大球盖菇耐高温菌株的选育研究

摘要

大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）是一种重要的食、药用真菌，其味美色优，营养丰富，具有增强人体免疫、降低血糖等保健及药用价值。大球盖菇属于中低温型食用菌，其菌丝生长温度适应范围为5～35℃，子实体形成及生长的温度范围为10～20℃，在栽培实践中料温30℃以上易导致菌丝出现“烧菌”现象，当气温上升至20℃时子实体易开伞，品质变差，25℃时原基不分化。在我国华东地区露天栽培时，若8～9月份播种，11～12月份出菇时产品质量好，耐储存，但播种后易遭遇到30℃以上高温，造成“烧菌”，导致栽培失败或减产。因此在生产上一般安排在10～11月份播种，次年4月上旬地温稳定在12℃以上开始出菇，但由于春末夏初季节气温、地温均回升很快，在5月中旬以后子实体易开伞、不耐储存，商品品质迅速下降。为了解决生产上初秋早播菌丝不耐高温、晚秋播种来年春末夏初子实体易开伞的问题，本研究从菌丝耐高温驯化入手，在初筛获得耐高温驯化菌株的基础上，通过原生质体育种技术，定向选育出大球盖菇耐高温菌株，并对其进行室内外验证，最后筛选出优质高产的耐高温菌株，以期为华东地区提供可早秋栽培初冬季节采收的耐高温菌株，或者可延长春季出菇期的耐高温菌株。 主要研究结果如下： 1.试验菌株的收集及遗传多样性和亲缘关系分析通过SRAP分子标记技术，对国内外收集的23株大球盖菇菌株，进行亲缘关系和遗传多样性分析。结果表明，SRAP技术可以将23株大球盖菇菌株完全区分开，菌株TA和JN为同物异名菌株，去掉菌株JN，确定了22株供试菌株。 2.耐高温递进式循环驯化试验采用递进式高温循环培养的方式，对22株供试菌株进行耐高温驯化，循环参数分别为（26℃，16h；30℃，8h）、（26℃，16h；34℃，8h）、（26℃，16h；38℃，8h）、（26℃，18h；42℃，6h），每组循环16次，以26℃恒温培养的菌株作为对照，筛选耐高温菌株。获得4株可在38℃条件下培养8h小时生长良好，并可在42℃环境中存活6h的菌株，编号为S2、T2、Z2和D2。 3.大球盖菇原生质体育种试验 （1）选用耐高温递进式循环驯化初筛选出的D2作为供试菌株，进行了原生质体制备条件的单因素筛选试验。结果表明，在32℃，1.5%的溶壁酶的条件下酶解菌龄为4d的菌丝体3h，原生质体产量最高。 （2）选用耐高温递进式循环驯化初筛选出的S2为出发菌株制备原生质体，在34℃条件下再生，定向选育出4株在38℃条件下菌丝生长速率高于出发菌株的耐高温菌株，编号为S18、S20、S24和S26。 （3）以耐高温驯化株D2为出发菌株进行原生质体紫外诱变，34℃条件下定向选育出3株菌丝生长速率高于出发菌株的耐高温诱变菌株，编号为大11、大15和大16。 （4）以耐高温驯化菌株S2和D2为亲本进行原生质体融合，34℃条件下定向选育出4株菌丝生长速率高于出发菌株的耐高温高产融合菌株，编号为R7、R9和R10和R15。 4.大球盖菇耐高温菌株验证对筛选出的15株耐高温菌株进行拮抗试验、继代培养、SRAP亲缘关系分析，在此基础上进行了大球盖菇出菇试验，最终筛选出3株优良耐高温大球盖菇菌株，编号为S20、D2和R10。其中，菌株S20，在气温36℃、料温30℃以上条件下定植快、发菌好，出菇期比对照提前15d，产量最高，且在25℃条件下原基正常分化；其次为菌株D2，在气温36℃、料温30℃条件下生长迅速，出菇期比对照菌株提前10d以上，产量仅次于S20；菌株R10其原基可在30℃环境下正常分化，在25℃环境下子实体不易开伞，一级菇比例最高。

目录

声明

1 前言

1.1 概述

1.1.1 大球盖菇分类地位及形态特征

1.1.2 大球盖菇的食、药用价值

1.1.3 大球盖菇的产业发展现状

1.2 大球盖菇研究进展

1.2.1 大球盖菇生物学特性研究进展

1.2.2 大球盖菇栽培技术的研究进展及存在问题

1.3 食用菌育种研究现状及研究进展

1.3.1 食用菌菌株的亲缘关系分析

1.3.2 食用菌育种技术研究进展

1.3.3 食用菌耐高温选育研究

1.4 研究背景及意义

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 供试菌株

2.1.2 供试培养基及配方

2.2 试验方法

2.2.1 供试菌株遗传多样性及亲缘关系分析

2.2.2 大球盖菇菌丝耐高温递进式循环驯化试验

2.2.3 大球盖菇原生质体育种试验

2.2.4 耐高温菌株的验证

3 结果与分析

3.1 供试菌株遗传多样性及亲缘关系分析

3.1.1 SRAP引物筛选及其扩增结果

3.1.2 聚类分析

3.2 大球盖菇菌株耐高温递进式循环驯化结果与分析

3.3 原生质体育种试验结果与分析

3.3.1 各因素对耐高温大球盖菇原生质体的影响

3.3.2 原生质体高温再生菌株的筛选

3.3.3 大球盖菇原生质体紫外诱变效应曲线的建立及诱变菌株的筛选

3.3.4 大球盖菇原生质体融合菌株的筛选

3.4 耐高温菌株验证结果与分析

3.4.1 拮抗验证结果

3.4.2 继代培养结果

3.4.3 亲缘关系鉴定结果

3.4.4 大球盖菇栽培出菇试验结果

4 讨论

4.1 供试菌株的亲缘关系分析

4.2 大球盖菇菌丝耐高温递进式循环驯化试验

4.3 大球盖菇原生质体育种

4.4 耐高温菌株的验证

4.5 不足之处

5 结论

（1）供试菌株亲缘关系分析

（2）大球盖菇耐高温驯化

（3）大球盖菇原生质体育种

（4）大球盖菇耐高温菌株验证

参考文献

附录

致谢

攻读硕士期间发表的论文