欧美杨107茎尖脱毒及组培快繁研究

摘要

欧美杨107（populus×euramericana cv.“Neva”)是中国林科院张绮文研究员于1984年从意大利引入我国的杨树新品种，该品种具有树形美、干形直、尖削度小、树冠窄小、病虫危害少、生长迅速等优点，已经成为了我国北方地区广泛栽培的杨树优良品种之一。近年来，由于欧美杨107长期采用无性繁殖方式繁殖苗木，导致许多真菌、细菌及病毒的出现，使得欧美杨107种性慢慢退化，植株抗逆性，速生性明显降低。为恢复欧美杨107优良种性，并对其品种进行苗木复壮。本研究便采用欧美杨107大田茎段、茎尖、叶片、根及其瓶苗茎段、顶芽、瓶苗叶片为实验材料，进行脱毒实验及其检测比较。还采用选育出的2株欧美杨107优良单株进行组培扩繁等。以期建立一套操作简单、快速高效且效果稳定完善的脱毒快繁技术体系，旨在恢复欧美杨107良种种性，为杨树良种的长期推广具有积极的指导意义。主要结论如下： 1、采用带有顶芽或腋芽的两株优良单株的大田茎段为外植体材料，切取长1cm且每段带有一个顶芽或腋芽的茎段，接于诱导分化培养基培养，最后得到大量优良单株组培苗。 2、取经组织快繁培养得到的优良单株瓶苗茎段进行分化增殖正交实验，筛选最适宜的分化增殖配方。结果为1/2MS+6-BA0.45mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA1.0mg·L-1的培养基分化增殖效果最好，最高增殖数达26。 3、用优良单株继代增值的不定芽，接种于生根培养基，筛选最适合的生根配方，实验表明，生根效果最理想的培养基为1/2MS+NAA0.02mg·L-1+IBA0.05mg·L-1，生根率100%，平均生根数5.9条。 4、欧美杨107茎尖脱毒培养，成功获得4个脱毒株系。通过采用（ELISA）检测技术对4个株系进行检测，结果显示，茎尖培养得到的4个株系中杨树烟草脆裂病毒（TRV）完全脱除，被检测脱毒株系OD值均小于病毒临界值(CUT OFF)0.2395；而被测4个株系中杨树花叶病毒（PV-1）未完全脱除，其中一个株系被检测OD值大于病毒临界值(CUT OFF)0.2175。 5、为更好脱去欧美杨107的病毒，对欧美杨107采用变温热处理结合茎尖脱毒，热处理过程中瓶苗生长迅速，同时伴有叶变黄，皱缩、落地现象发生，瓶苗耐受时间最长为24d，热处理结束后被剥离的茎尖生长快，褐化现象明显减少甚至没有，保存率比较高。将热处理培养成的幼苗进行检测，结果表明，杨树烟草脆裂病毒（TRV）和杨树花叶病毒（PV-1）两种病毒在被检测植株体内都不存在，被检测植株OD值均小于两种病毒临界值，说明热处理与茎尖结合能够有效同时脱除TRV和PV-1两种病毒。 6、欧美杨107化学结合茎尖处理脱毒，检测结果说明，当添加病毒唑15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1时能够同时将TRV和PV-1两种病毒脱除，添加这三种浓度被检测植株的OD值均小于两种病毒的临界值；而低于15mg·L-1时两种病毒均不能脱出。但在实验过程中15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1病毒唑处理对试管苗生长均有抑制作用，浓度越高抑制作用越强，15mg·L-1继代多次后，抑制作用减轻或降为零，瓶苗保存率比较高，而20mg·L-1、25mg·L-1病毒唑有时严重抑制瓶苗的生长，保存率极低，所以15mg·L-1在欧美杨107化学处理中为首选浓度，脱毒处理效果也比较理想。

目录

声明

1前 言

1.1植物茎尖脱毒发展历史及其原理

1.2杨树茎尖脱毒组织培养研究进展

1.3研究目的与意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3欧美杨107茎尖脱毒培养

3结果与分析

3.1欧美杨107优良单株组培快繁

3.2欧美杨107茎尖脱毒培养

3.3欧美杨107热处理结合茎尖脱毒

3.4化学处理结合茎尖脱毒

4讨论

4.1 适宜培养基的筛选

4.2 欧美杨107不同脱毒方式结果不同

4.3 欧美杨107脱毒检测结果比较

4.4 化学处理对瓶苗及脱毒情况的影响

5结论

5.1适宜培养基的筛选结果

5.2对欧美杨107采用茎尖脱毒处理结果

5.3欧美杨107热处理结合茎尖脱毒处理结果

5.4欧美杨107化学处理结合茎尖脱毒处理结果

参考文献

致谢