固相合成睡眠肽及成骨生长肽的研究

摘要

本文首先对多肽的一些内容进行了简单介绍，包括多肽的概念、多肽的合成发展史、多肽的各种制备方法、基本原理、国内外研究现状、及其分析纯化方法和研究意义。主要研究了睡眠肽和成骨生长肽的Fmoc法固相合成及分离纯化，固相合成中系统地研究了树脂类型、保护基、缩合时间、反应溶剂、缩合剂、偶连率的测定方法和树脂切割条件对合成质量的影响，确立了最佳的工艺条件为：以DMF为反应溶剂，TBTU为缩合剂， TFA：对甲基苯酚：EDT：水为97：0.25：0.25：2.5(V/V)的切割液配制条件，3倍过量投料进行缩合反应，反应时间为3hr。此反应条件能够成功的合成睡眠肽和成骨生长肽。通过对睡眠肽和成骨生长肽的分离纯化研究，确立了纯化工艺为：先用凝胶色谱柱纯化，纯化后产品的纯度提高到60％，再以反相高效液相制备层析进行最终纯化，最终纯化结果纯度达到95%以上。
　　此外，本文的其中一个目的是在原睡眠肽序列的基础上，引入了一段氨基酸序列，希望能够具有增强其穿透细胞膜作用，并进行了其生物活性测试。但是从测试结果看，没有明显的效果，成骨生长肽的穿膜活性实验因为时间有限，没有来得及做，下一步将继续测试其穿膜活性。论述了在合成这段序列过程中遇到的问题，并对其进行了分析，对后面的工作提出了一些建议。

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Contents

1 文献综述

1.1 多肽的概念和性质

1.2 多肽合成的发展史

1.3 多肽制备的基本方法

1.4 固相合成多肽的原理

1.5 Fmoc固相合成中的偶连方法

1.6 合成多肽的国内外研究发展现状

1.7 多肽的分离纯化

1.8 多肽的分析方法

1.9 多肽合成的研究意义

2 睡眠肽的合成及纯化

2.1 前言

2.2 仪器和设备

2.3 试剂

2.4 实验装置图

2.5 睡眠肽合成实验方案

2.6 睡眠肽的质谱检测

2.7 睡眠肽的分离纯化

3 增强睡眠肽的穿膜性及活性实验

3.1前言

3.2仪器和设备

3.3试剂

3.4合成装置图

3.5合成实验

3.6活性实验

4 成骨生长肽的合成及纯化

4.1 前言

4.2 仪器和设备

4.3 试剂

4.4 实验装置图

4.5 成骨生长肽的合成实验

4.6 成骨生长肽的定性检测

4.7 成骨生长肽的分离纯化

5 实验结果与讨论

5.1 树脂的选择及活化

5.2 多肽合成中保护基的选择

5.3 连结第一个氨基酸到树脂

5.4 偶连率的测定

5.5 连结第二个氨基酸到最后一个氨基酸

5.6 多肽合成中裂解液的选择

5.7 多肽合成结果的定性表征

5.8 HPLC分析及纯化合成多肽

5.9 活性实验结论

6 结论与建议

6.1 结论

6.2 对今后工作的建议

致谢

攻读硕士期间主要工作成果

参考文献