骨肉瘤miRNA-34a基因启动子甲基化水平改变及其调控作用研究

摘要

目的：检测骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化水平，观察去甲基化对人骨肉瘤细胞增殖及其miRNA-34a表达的影响，探讨骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化的调控作用。
　　方法：运用实时定量 PCR（real-time PCR）检测对比人骨肉瘤细胞株（MG-63、SAOS-2）及成骨细胞株（hFOB1.19）中miRNA-34a的表达差异；采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析质谱技术（MALDI-TOF）检测对比人骨肉瘤细胞与成骨细胞、骨肉瘤蜡块组织与正常骨组织中miRNA-34a启动子CpG岛甲基化水平的差异；用1%5-氮杂-胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine，Aza）对人骨肉瘤细胞进行去甲基化处理，观察去甲基化处理后人骨肉瘤细胞生长状态，并检测分析去甲基化处理前后人骨肉瘤细胞中miRNA-34a表达量及其启动子甲基化水平的变化。
　　结果： miRNA-34a在MG-63、SAOS-2细胞中的表达量明显低于hFOB1.19细胞，差异具有统计学意义（P<0.05）。MG-63、SAOS-2细胞中miRNA-34a基因启动子CpG岛甲基化水平高于 hFOB1.19细胞，差异具有统计学意义（P<0.05）。骨肉瘤组织中miRNA-34a基因启动子CpG岛甲基化水平高于正常骨组织对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；MG-63、SAOS-2细胞经去甲基化处理后生长增殖受限，检测miRNA-34a均表达上调（P<0.05），且miRNA-34a启动子CpG岛甲基化水平均降低（P<0.05）。
　　结论：骨肉瘤miRNA-34a基因启动子为高甲基化水平，miRNA-34a基因表达下调与其启动子高甲基化修饰有关，进而影响了其抑制骨肉瘤的生物学作用；提示miRNA-34a基因与DNA甲基化的调控修饰可能参与了骨肉瘤的增殖发展过程。

目录

声明

中英文缩略词

前言

材料与方法

1. 材料

2. 方法

3. 统计学方法

结果

1. 细胞的生长与干预

2. 抽提RNA的质检结果

3. 抽提DNA的质检结果

4. miR-34a在细胞样本中的表达

5. miR-34a启动子甲基化检测

讨论

结论

参考文献

综述:脊柱转移瘤的评估及治疗决策

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录

个人简介