人乳腺癌热休克蛋白70/Her-2癌基因蛋白复合物分离与纯化的研究

摘要

目的：探讨乳腺癌细胞中热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP 70)与Her-2癌基因蛋白复合物的分离纯化方法，并进行鉴定分析，建立一个稳定、高效的分离、纯化技术平台，为乳腺癌个体化免疫治疗奠定理论及实验基础。方法：用高表达原癌基因Her-2的乳腺癌细胞株SKBR-3作为实验细胞，并经流式细胞技术检测其中Her-2的表达情况。经免疫共沉淀方法检测细胞株中HSP70和Her-2癌基因蛋白的存在形式。采用裂解液裂解、超声破碎、高速离心、ConA Sepharose亲和层析结合ADP agarose亲和层析方法，从热休克(42℃)处理后的人乳腺癌细胞株SKBR-3中分离纯化出HSP70/Her-2癌基因蛋白复合物，通过SDS-PAGE电泳、Western-blot检测进行蛋白分子量及性质鉴定。结果：原癌基因Her-2在SKBR-3细胞株中高表达，且Her-2癌基因蛋白与HSP70在细胞株中以复合物的形式存在。纯化后获得的蛋白复合物中包含相对分子质量分别为70KD和185KD的蛋白，且分别能与抗HSPT0和抗Her-2特异单抗结合，证实为HSP70和HER-2癌基因蛋白。结论：采用裂解液裂解、超声破碎、高速离心、ConASepharose亲和层析结合ADP agarose亲和层析的方法可以从人乳腺癌SKBR-3细胞株中获得相对纯度较高的HSP70/Her-2癌基因蛋白复合物，该工作的完成为进一步研究以HSP70/Her-2癌基因蛋白复合物为基础的乳腺癌个体化免疫治疗提供了依据。

目录

论文说明：英文缩略语表

声明

引言

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

4.结论

5.附图

6.参考文献

文献综述:Her-2与乳腺癌研究进展

攻读学位期间发表文章情况

个人简历

致谢