人胆囊癌裸鼠原位模型的建立、单克隆细胞株的分离及双自杀基因体内外杀伤作用的研究

摘要

利用组织块法建立技术较为成熟的人胆囊癌裸鼠原位于移植瘤模型,了解其生长特点、镜下形态、超微结构、染色体分析及肿瘤标志物的表达等生物学特性,同时利用免疫组化法检测瘤组织中一些与侵袭和转移相关的蛋白表达.人胆囊癌裸鼠原位移植瘤模型能够更好模拟临床上胆囊癌的特点,原位瘤组织具有较强的侵袭和转移能力,它的建立为胆囊癌的研究提供了一良好的平台工具.从人胆囊癌细胞GBC-SD中筛选出具有高侵袭力的单克隆细胞株,了解其生物学活性,分析乙酰肝素酶在此单克隆细胞株中的表达情况,了解抑制乙酰肝素酶后其侵袭力的变化情况.在由GBC-SD细胞分离出的各个单克隆细胞株中,GBC-SDH<,i>细胞具有较高的侵袭力;GBC-SDH<,i>细胞与其亲代细胞相比,在形态学、染色体分析、细胞粘附分子及金属蛋白酶的表达等方面有所差别;乙酰肝素酶反义寡核苷酸通过下调乙酰肝素酶mRNA和蛋白的表达来抑制GBC-SDH<,i>细胞的侵袭力,并且呈现剂量依赖性.将携带CD和HSV-tk融合基因的逆转录病毒载体转染胆囊癌细胞GBC-SD,配合前体药物的应用,以探讨CD+tk双自杀基因疗法对胆囊癌细胞的体内外杀伤作用及旁观者效应,以寻找强大、有效的自杀基因治疗方式.转染双自杀基因的胆囊癌GBC-SD/CD+tk细胞一般生物学特性与GBC-SD细胞无明显差异;在体外双自杀基因体系对胆囊癌细胞具有强大的杀伤效果,其旁观者效应明显;体内双自杀基因体系对于裸鼠移植瘤也有明显的治疗作用,也可观察到一定的旁观者效应,但是基因的体内直接转染效率有待进一步的提高.

目录

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符号说明

第一部分人胆囊癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图表

参考文献

第二部分高侵袭力胆囊癌单克隆细胞株的分离及乙酰肝素酶反义寡核苷酸对其侵袭力逆转的研究

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图表

参考文献

第三部分联合应用双自杀基因对胆囊癌细胞杀伤作用的体内外研究

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图表

参考文献

致谢

学位论文评阅及答辩情况表