运用nestin-EGFP转基因小鼠研究脑和胰腺中nestin阳性细胞的体外增殖分化潜能

摘要

目的:该课题旨在通过建立细胞内源蛋白nestin的启动子/增强了所驱动的报告基因EGFP表达的转基因小鼠,经过流式细胞仪分选出脑和胰腺中nesin阳性细胞,在体外检测脑来源的nestin阳性细胞是否具有神经干细胞的增殖分化潜能,能否代表神经干细胞群体;胰腺来源的nestin阳性细胞是否胰腺的干细胞,是否具有干细胞的特性.这为神经干细胞的分离纯化提供一种可行有效的方法,并为胰腺干细胞的初步研究提供一套简便可靠的体外分离、培养、诱导分化、鉴定的方法.这对于研究神经系统和胰腺的发育过程,研究发育机制及临床治疗神经系统疾病和糖尿病都具有十分重要的意义.结论:1.产生的nestin-EGFP转基因小鼠在脑和胰腺中nestin的表达模式和EGFP的是一致的,因此可以根据EGFP的荧光强度通过流式细胞仪来分离纯化nestin阳性细胞.转基因小鼠结合流式细胞仪分选为干细胞的分离纯化提供了一种方便可行、技术可靠的方法,纯度可以达到95﹪以上.2.脑来源的nestin阳性细胞(15-20﹪)在体外培养中具有神经干细胞的增殖和分化潜能,并表达神经干细胞的特异标志蛋白.解决了神经干细胞的分离纯化难的问题,得到了纯度相当高的神经干细胞.3.胰腺来源的nestin阳性细胞不具有胰腺干细胞的特性,而CD24<'low/->nestin<'neg>这群细胞中富集能分化为内分泌腺各种细胞的胰腺内分泌腺干/祖细胞.同时也说明我们建立的胰腺干细胞体外培养体系和分化体系以及鉴定方法是有效的、可靠的.

目录

原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

符号说明

第一部分文献综述

综述一神经干细胞的研究进展

综述二胰腺干细胞的研究进展

综述三转基因小鼠的研究进展

第二部分实验研究工作

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

附图表(一)

附图表(二)

参考文献

综述一参考文献

综述二参考文献

综述三参考文献

论文参考文献

致 谢

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