传染性法氏囊病病毒FX株VP2基因的克隆、表达及其免疫原性研究

摘要

利用RT-PCR扩增了IBDV阜新(FX)分离株VP2基因，并对扩增序列进行了分析。结果显示FX株VP2基因全长1536bp、编码512个氨基酸：与GenBank中己报道的IBDV毒株相比，VP2基因核苷酸的同源性为54.4％-99.3％，推导的氨基酸序列同源性为46.1％-98.4％；遗传进化分析表明，FX株VP2基因与Gt株同源性最高；用DNAstar软件对FX株VP2蛋白抗原表位进行分析，发现其与B87(吉林)株和B87 VP2(南京)株存在差异，说明FX株与疫苗株VP2蛋白抗原特性存在差异。 利用原核表达质粒pGEX-6P-1，对VP2基因进行了表达。结果表明，经酶切和PCR鉴定，表明获得了含VP2基因的重组蛋白pGEX-6P-1-VP2。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，受体菌BL21(DE3)能表达结构蛋白基因VP2，经SDS-PAGE及Westem Blotting分析，表达产物分子量约40KDa，且能与IBDV阳性血清发生特异性的免疫反应。重组蛋白用GST标签的高亲和树脂层析柱纯化，表达量为1.168mg/mL。 用生理盐水、费氏完全佐剂、融合蛋白pGEX-6P-1-VP2免疫健康鸡，四次免疫后，三组鸡同时用IBDV FX株经肌肉注射攻击感染，剂量为100μL/羽，融合蛋白pGEX-6P-1-VP2保护率为40％，佐剂组保护率10％，对照组鸡全部死亡。结果表明融合蛋白pGEX-6P-1-VP2具有一定的免疫保护力。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一篇 文献综述

第一章 IBDV基因组结构及病毒蛋白研究进展

第二章 IBD基因工程疫苗研究进展

第二篇 研究内容

第一章IBDV FX株VP2基因的克隆

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

第二章IBDV FX株VP2基因的原核表达

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

第三章IBDV的免疫原性研究

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

结论

参考文献

附录

致谢

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