Ⅰ.肿瘤浸润T淋巴细胞亚群与非小细胞肺癌5年生存率的相关性研究;Ⅱ.鼠CD137L在噬菌体上的展示及抗原性检测

摘要

目的： 肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，尽管肺癌的诊断技术和治疗方法不断改进，5年生存率仍然较低，因此，分析与肿瘤预后有关的因素，对提高肺癌病人的5年生存率有重要价值。研究发现某些肿瘤(如，食道癌、胰腺癌、结肠直肠癌)浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)的数量和T细胞亚群与肿瘤的预后有明显的关系，但肿瘤浸润淋巴细胞，特别是CD4<'+>、CD8<'+>T细胞亚群与非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)预后的研究很少，说法不一。有关CD4<'+>和CD8<'+>T细胞亚群及CD25<'+>T细胞亚群与病人5年生存率的关系未见报道。 为了研究肿瘤浸润淋巴细胞对肺癌患者生存和预后的影响，我们通过随访，对手术满5年的肺癌患者病理组织进行腿染色和免疫组化染色，分析肿瘤浸润淋巴细胞浸润总数和CD4<'+>、CD8<'+>、CD25<'+>T细胞亚群与非小细胞肺癌患者5年生存率的关系，为寻找提高非小细胞肺癌患者5年生存率的有效办法和探索合理的治疗途径提供第一手资料。 方法： 1、病例及临床资料的收集 收集1999～2001年的肺癌病例并进行随访，确定其目前存活情况，将其划分为5年生存组和5年内死亡组两组。 2、HE染色 对患者的病理组织切片进行HE染色，显微镜下观察淋巴细胞浸润总数，并对每例进行分级、计分。 3、免疫组化染色 用抗CD4、抗CD8、抗CD25三种单抗进行免疫组化染色，显微镜下观察，计算各例患者CD4<'+>、CD8<'+>、CD25<'+>T细胞亚群的阳性率，并计算出(CD8<'+>+CD4<'+>)和CD25<'+>/CD4<'+>、CD25<'+>/CD8<'+>、CD25<'+>/(CD4<'+>+CD8<'+>)等各比值。 4、统计分析 用两组等级资料比较的秩和检验分析淋巴细胞浸润总数与非小细胞肺癌患者5年生存率的关系；用两个独立样本比较的wilcoxon秩和检验分析CD4<'+>、CD8<'+>、CD25<'+>T细胞亚群浸润以及(CD8<'+>+CD4<'+>)和CD25<'+>/CD4<'+>、CD25<'+>/CD8<'+>、CD25<'+>/(CD4<'+>+CD8<'+>)等各比值与非小细胞肺癌患者5年生存率的关系。 结果： 1、病例及临床资料的收集 收集病例30例，其中5年生存者13例(男10例，女3例；鳞癌7例，腺癌6例)，5年内死亡者17例(男13例，女4例；鳞癌8例，腺癌6例，小细胞未分化癌3例)，5年生存率为43.3％。上述病例随访资料及病理组织齐全者22例，其中5年生存组10例(男8例，女2例；鳞癌6例，腺癌4例，5年内死亡组12例(男9例，女3例；鳞癌7例，腺癌3例，小细胞未分化癌2例)。因小细胞肺癌不在我们研究之列，故我们实际统计病例20例。 2、HE染色，分析淋巴细胞浸润总数与非小细胞肺癌患者5年生存率的关系 对上述20例患者的病理组织做HE染色，用两组等级资料比较的秩和检验分析淋巴细胞浸润总数与非小细胞肺癌患者5年生存率的关系，我们发现：5年生存组患者淋巴细胞浸润总数明显高于5年内死亡组患者(P<0.05)。 3、免疫组化染色，分析各亚群浸润和各比值与非小细胞肺癌患者5年生存率的关系 对上述20例患者的病理组织做免疫组化染色，用两个独立样本比较的wilcoxon秩和检验分析各亚群浸润和各比值与非小细胞肺癌患者5年生存率的关系，我们发现：5年生存组患者CD8<'+>T细胞浸润百分率明显高于死亡组患者(P<0.05)；5年生存组患者(CD<'8+>+CD<'4+>)T细胞浸润总数明显高于5年死亡组患者(P<0.01)；而CD<'4+>、CD25<'+>T细胞浸润程度无明显差别；CD4<'+>/CD8<'+>、CD25<'+>/CD4<'+>、CD25<'+>/CD8<'+>和CD25<'+>/(CD4<'+>+CD8<'+>)等比值也无明显差别。 结论和创新性 1．肿瘤浸润淋巴细胞与非小细胞肺癌5年生存率密切相关，淋巴细胞浸润多者生存率高，淋巴细胞浸润少者生存率低。 2．浸润淋巴细胞中T细胞的浸润可用(CD4<'+>+CD8<'+>)来表示，其与肺癌5年生存率明显相关，5年生存者(CD4<'+>+CD8<'+>)浸润比5年内死亡者明显增多。 3．浸润淋巴细胞中以CD8<'+>T细胞为主，其与肺癌5年生存率明显相关，5年生存者CD8<'+>浸润比5年内死亡者明显增多。 4．CD4<'+>、CD25<'+>淋巴细胞的数量以及CD8<'+>/CD4<'+>、CD25<'+>/CD4<'+>、CD25<'+>/CD8<'+>、CD25<'+>/(CD4<'+>+CD8<'+>)等比值与肺癌的5年生存率无显著相关性。 5．肿瘤浸润的CD4<'+>、CD8<'+>T细胞亚群与非小细胞肺癌预后的研究很少，说法不一。另外，肿瘤浸润的CD4<'+>、CD8<'+>T细胞亚群及CD25<'+>T细胞与病人5年生存率的关系尚未见报道。本研究发现淋巴细胞浸润总数、CD8<'+>T的阳性率和(CD4<'+>+CD8<'+>)T数与肺癌患者的5年生存率显著相关，单独CD4<'+>、CD25<'+>淋巴细胞的数量与肺癌的5年生存率无显著相关性。所以我们认为，分析淋巴细胞浸润总数、CD8<'+>T细胞亚群和(CD4<'+>+CD8<'+>)T细胞可作为判断非小细胞肺癌患者预后的参考标准。为寻找提高非小细胞肺癌患者5年生存率的有效办法和探索合理的治疗途径提供了第一手资料。

目录

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符号说明

第一部分 肿瘤浸润T淋巴细胞亚群与非小细胞肺癌5年生存率的相关性研究

第二部分鼠CD137L在噬菌体上的展示及抗原性检测

总结

致谢

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