人卵母细胞体外成熟前后线粒体分布的变化

摘要

研究目的：本研究旨在通过对人未成熟和体外培养成熟后卵母细胞中线粒体的分布的比较，阐明卵母细胞成熟和线粒体分布的关系。 研究方法： (1)未成熟卵母细胞的来源：未成熟卵母细胞来源于自2006年3月至10月就诊于山东大学山东省立医院生殖医学中心，仅单纯男方因素或同时合并女方输卵管因素行卵母细胞内单精子显微注射的不孕症患者。经透明质酸酶消化后，所获未成熟卵母细胞经患者同意，并签署相关知情同意书后捐献用于医学科学研究。 (2)体内成熟的卵母细胞的来源：体内成熟的卵母细胞来源于同期在山东大学山东省立医院生殖医学中心就诊，行促排卵后同房或人工授精的不孕症患者，若注射HCG10 000IU 42h后仍未排卵，则行人工破卵治疗。即将大卵泡通过经阴道穿刺的方法使之破裂，卵泡液流出，同时卵子也进入腹腔，患者将有妊娠的可能。如果卵泡较多，为避免卵巢过度刺激综合征和多胎妊娠，会对部分小卵泡进行穿刺，穿刺获得的成熟卵母细胞经患者同意，并签署相关知情同意书后捐献用于医学科学研究。 将未成熟卵母细胞随机分为两组，采用荧光染色法，一组直接染色，另一组体外培养成熟后再进行染色。未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞均用MitoTracker Green FM染色，经多聚甲醛固定后，在激光扫描共聚焦显微镜下观察线粒体的分布。 结果：284个未成熟卵母细胞中有144个进行体外成熟培养，其中GV期卵母细胞88个，MI期卵母细胞56个。IVM 48 h后，56个GV期卵母细胞达到MⅡ期，成熟率为63.64﹪；50个MI期卵母细胞达到MⅡ期，成熟率为89.29﹪。MI期卵母细胞的成熟率明显高于GV期卵母细胞，两者之间的差别有统计学意义(P=0.016)。线粒体在细胞质中的分布方式可分为以下三种：周边分布、半周边分布和均匀分布。在64.10﹪(50/78)的GV期卵母细胞中，线粒体呈周边分布。在MI期卵母细胞中，线粒体呈均匀分布的占38.71﹪(24/62)，45.16﹪(28/62)的MI期卵母细胞的线粒体仍维持周边分布。体外培养成熟以后，线粒体在75.47﹪(80/106)的卵母细胞中呈现均匀分布。GV期卵母细胞中线粒体以周边分布为主，与MⅠ期和MⅡ期卵母细胞相比，其差异有统计学意义。成熟卵母细胞中线粒体大多呈均匀分布，与未成熟卵母细胞相比，也存在显著差异。由此可以看出，人卵母细胞成熟前后，线粒体发生了明显的分布变化，由未成熟卵母细胞中以周边分布为主变为成熟卵母细胞中以均匀分布为主。 体内成熟的11个卵母细胞中，线粒体呈均匀分布的有8个(72.73﹪)，另有3个呈周边分布(27.27﹪)。与体外培养成熟的卵母细胞相比，体内成熟的卵母细胞中线粒体分布的特点是胞质中央区域线粒体的浓集，荧光强度高于周边区域。 结论： (1)人卵母细胞成熟前后，线粒体出现了明显的分布变化，由未成熟卵母细胞中以周边分布为主变为成熟卵母细胞中以均匀分布为主。 (2)体内成熟的卵母细胞中线粒体的分布与体外成熟的卵母细胞略有不同。

目录

原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

符号说明

前 言

研究背景和意义

实验仪器与材料

实验方法

结 果

讨论

结论

附 图

参考文献

卵母细胞成熟过程中线粒体的变化

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文