中国明对虾抗脂多糖因子基因克隆及其在大肠杆菌中的重组表达

摘要

本文对中国明对虾抗脂多糖因子基因克隆及其在大肠杆菌中的重组表达进行了研究。主要成果如下： 1．中国明对虾ALF基因克隆根据在其它相近物种所得ALF基因的保守区进行比对，设计了中国明对虾克隆ALF基因中间片段的兼并引物，通过多次试验成功探索到克隆ALF基因的最佳条件，并克隆到280 bp的片段，据测序结果分别设计了克隆ALF3’和5’端的引物，利用它们分别和3’锚定引物、5’PCR Primer组成一对引物，克隆到了ALF的3’和5’端，通过测序并拼接获得了中国明对虾ALF全长基因。 2．重组表达载体的构建将已克隆到的中国明对虾ALF基因分别以pET-30a(+)和pGEX-4T-1为载体构建重组载体。 3．ALF基因在大肠杆菌的表达将构建好的重组载体转化感受态的大肠杆菌BL21，对中国明对虾的ALF基因在原核中的表达进行了研究，并对其表达的蛋白进行纯化。在表达过程中成功解决了基因中含有大肠杆菌稀有密码子引起的表这量低的难题。为研究者在解决表达量低的问题上提供了理论和实践依据。

目录

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摘要

符号说明

前言

1.对虾的免疫机制和免疫相关基因研究

1.1细胞免疫

1.2体液免疫及相关基因

1.3对虾抗菌肽

1.4酚氧化酶原系统

1.5热休克蛋白

1.6丝氨酸蛋白酶

1.7凝集素和凝血蛋白

2.ALF研究现状

2.1 ALF的结构与功能

2.2对虾病的防治及研究ALF的意义和前景

第一章中国明对虾抗脂多糖因子基因克隆

1.材料与方法

1.1动物取材

1.2试剂和仪器

1.3总RNA的提取

1.4逆转录合成cDNA

1.5 ALF基因中间片段的克隆

1.6 ALF基因3’端基因克隆

1.7ALF基因5’端克隆

1.8 ALF基因全长的克隆

1.9半定量PCR

2.结果与讨论

2.1 ALF基因中间片段

2.2 ALF基因3’端克隆

2.3 ALF基因5’端克隆结果

2.4中国明对虾抗脂多糖因子基因序列分析

2.5与其它物种的同源序列分析

2.6半定量分析

第二章ALF基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

1.材料与方法

1.1试剂与设备

1.2主要溶液配方

1.3方法

2.结果

2.1 ALF基因全长表达

2.2 ALF成熟肽表达

2.3改换密码子后ALF成熟肽的表达

3.讨论

论文总结

参考文献

致谢

已发表和待发表的论文