靶向Survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系Survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

摘要

研究背景与目的 Survivin属于IAP家族成员，特异的高表达于人类大多数肿瘤组织，并且与肿瘤细胞的凋亡、增殖及其耐药性的产生密切相关。本研究探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide ASODN)对MCF-7人乳腺癌细胞系增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响及其可能的机制。 研究方法 采用脂质体介导Survivin-ASODN转染MCF-7细胞，RT-PCR方法检测MCF-7细胞中Survivin mRNA的表达，MTT比色法检测细胞增殖能力及对紫杉醇的敏感性，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 研究结果 (1)Survivin-ASODN转染MCF-7细胞48h后，可使其survivinmRNA表达下调，在一定范围内抑制效应随浓度增加而增强，A200组下调至86.83％， A400组下调至76.72％，A600组下调至58.49％。与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度反义转染组间相比差异均有统计学意义(P<0.05)。 (2)Survivin-ASODN转染MCF一7后可抑制细胞的增殖，随着ASODN浓度和作用时间的增加，抑制率逐渐增高，A200、A400、A600组48 h时的增殖抑制率分别为22.25％、49.30％和58.62％；A600组24、48和72h时的增殖抑制率分别为39.60％、61.03％和70.74％。不同时间点之间和不同浓度组之间差异有统计学意义(P(0.05)。 (3)Survivin-ASODN转染MCF-7后发生细胞周期阻滞，A600组细胞24h主要阻滞于G2/M期，G2/M期占(40.58±2.07)％，而正常对照组、脂质体组和正义组G2/M期分别占(21.95±0.62)％、(20.29±0.78)％和(25.37±1.47)％，差异有统计学意义(P<0.05)。A600组细胞凋亡率较高，凋亡率达(15.23±1.01)％，正常对照组、脂质体组及正义组凋亡率分别为(5.09±0.37)％、(5.25±0.61)％、(6.31±0.72)％，差异有统计学意义(P<0.05)。 (4)紫杉醇作用于MCF一7细胞6 h后，可使其Stlrvivin mRNA表达明显增强，从0h的0.66±0.09提高至1.26±0.11，12h达到较高的水平至2.34±0.22，Survivin表达的增强利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡，增加肿瘤耐药的机会，作用24h后MCF一7细胞的survivin mRNA表达较前减低为1.01±0.29，48h时表达明显减弱为O.32±0.09，差异均有统计学意义(P<0.05)。 (5)紫杉醇处理6h后，正常组、脂质体组、正义组细胞survivin mRNA表达均明显增强，未加药组与加药组Survivin mRNA的相对含量分别为0.66±0.09、1.26±0.11；0.66±0.12、1.29±0.1l；0.65±0.08、1.24±0.14，差异有统计学意义(P<0.05)；A600组细胞加药后Survivin mRNA上调幅度低，未加药组与加药组SLlrvivin mRNA相对含量为0.38±0.11和0.5l±0.13，且A600加药组表达水平明显低于正常加药组、脂质体加药组、正义加药组上调后的表达水平，差异有统计学意义(P<0.05)(6)紫杉醇对ASODN转染的MCF一7细胞组增殖抑制率明显增高，抑制率达(82.30±5.26)％，与正常对照组(36.93±4.20)％相比，差异有统计学意义(P<0.05)。反义转染组细胞对药物的敏感性增加。 研究结论 survivin基因ASODN转染MCF-7细胞后，有效下调Survivin的表达，细胞周期阻滞于G2/M期，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡；紫杉醇作用早期，Survivin表达增强提高肿瘤细胞抵抗药物诱导凋亡的能力；survivin表达下调提高细胞对药物的敏感性。Survivin靶向治疗有可能成为乳腺癌治疗的重要途径之一。

目录

论文说明：符号说明及中英文对照

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前言

文献综述

材料与方法

结果

讨论

结论

附表及附图

参考文献

致谢

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