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论文说明:缩略表
声明
第一章前言
1.1.黄素依赖型双组分单加氧酶简介
1.2.生物脱硫和二苯并噻吩单加氧酶
1.2.1.生物脱硫的背景
1.2.2.碳碳键裂解途径
1.2.3.硫氧化途径
1.2.4.硫专一性代谢途径
1.2.5.DszC简介
1.3.活性氧的产生和清除
1.3.1.活性氧的来源
1.3.2.超氧化物歧化酶和过氧化氢酶
1.3.3.抗氧化体系和外源有机物代谢的关系
1.4.生物催化合成靛蓝和靛玉红简介
1.4.1.催化吲哚羟基化的微生物和酶
1.4.2.吲哚羟基化的区域选择性
1.4.3.靛蓝和靛玉红的生产
1.5.氧化还原反应辅因子再生的研究
1.6.全细胞生物催化简介
1.7.本文主要研究内容
1.8.参考文献
第二章二苯并噻吩单加氧酶催化DBT特性研究
2.1.材料与方法
2.1.1.主要试剂
2.1.2.主要仪器
2.1.3.菌株和培养基
2.1.4.DszC蛋白纯化
2.1.5.DszD蛋白纯化
2.1.6.DszC对于DBT的活力分析
2.1.7.DszC对于吲哚的活力分析
2.1.8.DszD活力测定
2.1.9.蛋白浓度测定
2.1.10.SDS-PAGE分析
2.1.11.过氧化氢浓度测定
2.1.12.序列分析
2.2.结果和讨论
2.2.1.蛋白质的表达和纯化
2.2.2.DszC既可以利用FMNH2也可以利用FADH2
2.2.3.还原黄素的自氧化
2.2.4.过氧化氢酶对反应的影响
2.2.5.DszC催化吲哚的反应
2.3.本章小结
2.4.参考文献
第三章脱硫基因的表达对菌体抗氧化蛋白产生的影响
3.1.材料和方法
3.1.1.主要试剂
3.1.2.主要仪器
3.1.3.菌株和质粒
3.1.4.粗酶液的制备
3.1.5.蛋白浓度的测定
3.1.6.超氧化物歧化酶的活性染色
3.1.7.过氧化氢酶活力的测定
3.2.结果和讨论
3.2.1.E coli BL21(DE3)(pECD1)的构建
3.2.2.硫源对于超氧化物歧化酶表达谱的影响
3.2.3.脱硫基因表达对菌体过氧化氢酶活力的影响
3.3.本章小结
3.4.参考文献
第四章利用葡萄糖脱氢酶构建辅因子再生体系
4.1.材料和方法
4.1.1 主要试剂及仪器
4.1.2 菌株和培养基
4.1.3 分子操作
4.1.4 葡萄糖脱氢酶的制备
4.1.5 SDS-PAGE分析
4.1.6 葡萄糖脱氢酶活力测定
4.1.7 辅因子循环体系的建立
4.1.8 吲哚转化产物的测定
4.2.结果和讨论
4.2.1 GDH的基因克隆、表达和纯化
4.2.2 利用GDH构建辅因子再生体系
4.3.本章小结
4.4.参考文献
第五章全细胞共表达DszC和DszD催化吲哚及取代吲哚的转化
5.1.材料和方法
5.1.1.实验材料
5.1.2.主要实验仪器
5.1.3.菌株
5.1.4.生物催化剂的制备
5.1.5.生物转化过程
5.1.6.样品分析
5.1.7.靛玉红的制备
5.2.结果和讨论
5.2.1.三种全细胞形式的催化剂的比较选择
5.2.2.IPTG诱导时机的选择
5.2.3.转化吲哚生成靛蓝的条件优化
5.2.4.吲哚浓度对转化的影响
5.2.5.靛玉红的产生
5.2.6.全细胞转化取代吲哚
5.3.本章小结
5.4.参考文献
附录
结束语
读博士期间发表论文
致谢