面肩肱型肌营养不良的临床与病理学特点及血管因素在本病发病机制中的作用研究

摘要

目的：通过对26例面肩肱型肌营养不良症(FSHD)患者的临床资料及肌活检组织病理结果进行分析，总结FSHD的临床及肌肉病理特点，总结FSHD肌肉病理中炎性浸润及血管炎性病理改变的特点并观察FSHD肌组织中新生血管数量的变化，应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法对血管生成相关基因表达进行定量分析，探讨血管因素在FSHD发病机制中的作用。
　　 方法：选取2007～2009年在山东大学齐鲁医院神经肌肉病理研究室进行肌肉活检的26例FSHD患者，全部入选患者均符合FSHD临床诊断标准[1.2]。根据患者肌活检组织HE切片，按有无炎性细胞浸润分为非炎性浸润组和炎性浸润组，并根据炎症细胞浸润的部位不同将炎性浸润组分为肌内膜炎、血管周围炎及跨壁血管炎三个亚组。比较非炎性浸润组和炎性浸润组两组患者的主要临床特点，包括性别、家族史、发病年龄、病程、受累部位及对称性、肌酸激酶(CK)值及肌电图表现。同时收集20例炎症性肌病患者(多发性肌炎、皮肌炎各10例)肌活检组织作为炎性对照组．另外选取10例有肌无力症状但肌活检病理正常，最终证实为其他系统疾病而非神经肌肉病的病例作为正常对照组。对炎性对照组及FSHD中炎性浸润组行抗CD4、抗CD8、抗CD20及抗CD68分子免疫组织化学染色观察浸润的炎症细胞的类型。对血管周围具有炎症细胞浸润的FSHD肌活检组织行抗CD3分子、抗血管平滑肌肌动蛋白(SMA)免疫组织化学染色及双重免疫荧光组织化学染色，以证明部分FSHD患者肌组织中炎症细胞已经浸润血管壁形成血管炎。对FSHD及正常对照组肌活检组织行抗CD34分子免疫组织化学染色以观察两组肌组织中血管数量的变化。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法对FSHD各组及正常对照组的VEGF A、VEGF C、FRG1、VE-cadherin和DUX4 mRNA的表达进行定量分析。
　　 结果：1.26例FSHD患者发病年龄为25.2±12.6岁，病程7.8±7.3年，男女之比为1.6：1，其中5例患者有家族史。所有的患者均表现为面肌、肩胛带肌及上肢肌群的进行性无力和萎缩，18例患者骨盆带肌及或下肢远端受累，24例两侧不对称受累。2．FSHD肌活检组织的主要病理学特点为：20例肌活检组织符合肌营养不良病理改变，表现为肌纤维坏死伴吞噬现象及再生纤维，肥大及劈裂纤维，内核纤维增多，结缔组织明显增生；6例仅为轻度肌源性改变，可见肌纤维大小轻、中度不等及散在的小角形纤维。2例可见不典型破碎红纤维，1例可见镶边空泡形成。肌原纤维网格状结构排列紊乱，其中5例可见分叶状纤维，4例可见虫蚀样纤维，4例可见涡轮状纤维，2例可见靶样或轴空样纤维。17例(65.4％)可见灶性炎性细胞浸润，其中4例炎细胞仅位于肌内膜，7例为血管周围炎，6例血管壁内可见炎细胞浸润，为跨壁的血管炎。免疫组化染色证实浸润的炎症细胞主要为CD4+T淋巴细胞及CD20+B淋巴细胞。3．炎性对照组中，皮肌炎肌组织中浸润的炎症细胞类型与FSHD类似，而多发性肌炎则以CD8+T淋巴细胞为主。4．免疫组化染色证实炎性浸润组的FSHD患者肌组织中新生血管增生较非炎性浸润组及正常对照组显著。5．FSHD肌肉组织中VEGF-A、VEGF-C、FRG1、VE-cadherin及DUX4 mRNA的表达水平：①FRG1: FSHD肌肉组织中FRG1 mRNA表达(1.39±0.12)和对照组(1.47±0.07)相比无明显统计学差异，但是在FSHD各亚组中，炎性浸润组(1.84±0.41)明显高于非炎性浸润组(0.97±0.21)(P＜0.05)，尤其是跨壁血管炎组(2.14±0.17)最为明显，高于肌内膜炎组(1.42±0.14)(P＜0.05)，但和血管周围炎组相比差异无统计学意义。②DUX4: FSHD肌肉组织中DUX4 mRNA表达(0.35±0.05)和对照组(0.27±0.09)相比无明显统计学差异(P＞0.05)，且在FSHD各亚组之间其表达差异均无统计学意义。③VEGF-C:FSHD肌肉组织中VEGF-C mRNA表达(1.58±0.26)显著高于对照组(0.76±0.15)(P＜0.01)，在FSHD各亚组中，炎性浸润组(2.26±0.71)明显高于非炎性浸润组(0.43±0.03)(P＜0.05)，跨壁血管炎组(2.82±0.15)和血管周围炎组(2.37±0.53)明显高于肌内膜炎组(0.82±0.21)(P＜0.01)，但跨壁血管炎组和血管周围炎组相比差异无统计学意义。④VEGF-A:FSHD肌肉组织中VEGF-A mRNA表达(2.29±0.36)显著高于对照组(0.89±0.16)(P＜0.01)，在FSHD各亚组中，炎性浸润组(3.09±0.33)明显高于非炎性浸润组(0.68±0.19)(P＜0.05)，尤其是跨壁血管炎组(3.84±0.33)最为明显，明显高于肌内膜炎组(1.53±0.49)(P＜0.05)和血管周围炎组(2.91±0.27)(P＜0.05)。⑤VE-cadherin: FSHD肌肉组织中VE-cadherin mRNA表达(0.87±0.11)显著高于对照组(0.28±0.05)(P＜0.05)，在FSHD各亚组中，炎性浸润组(1.28±0.17)明显高于非炎性浸润组(0.25±0.01)(P＜0.05)，尤其是跨壁血管炎组(1.52±0.25)最为明显，明显高于肌内膜炎组(0.45±0.13)(P＜0.05)，但和血管周围炎组(1.36±0.12)比较差异无统计学意义，血管周围炎组明显高于肌内膜炎组(P＜0.05)。⑥FSHD各亚组中，炎性浸润组VEGF-A、VEGF-C、FRG1、VE-cadherin表达水平均明显高于非炎性浸润组，尤其是跨壁血管炎组最为明显，并且这种表达的差异和FRG1的表达水平呈正相关(VEGF-Ars=0.447,P＜0.02；VEGF-C rs=0.382,P＜0.05:VE-cadherinrs=0.459,P＜0.02)
　　 结论1．具有炎性浸润的FSHD肌组织内，除了以往认为的肌内膜炎及血管周围炎，亦可见到典型的跨壁血管炎。2．具有炎性浸润的FSHD患者的肌组织中血管增生显著。3．血管相关基因VEGF和VE-cadherin表达水平在FSHD肌肉组织发生炎性浸润尤其是发生血管炎时，表达明显上调，并和FRG1的表达水平呈正相关。4．血管病理因素可能与本病的发病机制有关。