HSP60在胃癌中的表达与微血管生成的关系及临床意义

摘要

目的:
　　 检测热休克蛋白-60(HSP60)在胃癌组织及细胞系中的表达及其与肿瘤微血管生成的关系，初步探讨其在胃癌新生血管生成的作用机理及临床意义，并评价其在胃癌发生发展中的价值。
　　 方法:
　　 1.应用免疫组织化学SP法检测HSP60蛋白在85例胃癌组织及35例癌旁正常胃组织中的分布及表达情况，探讨其与胃癌临床病理特点关系。
　　 2.应用免疫组织化学SP法通过测定CD34蛋白来检测微血管密度(microvesseldensity，MVD)在85例胃癌组织及35例癌旁正常组织分布情况，探讨其与胃癌临床病理特点的关系。并应用spearman秩相关检验，检验HSP60和MVD表达间的相关性。
　　 3.应用实时定量PCR法检测HSP60在20例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中的表达，证实HSP60的表达在癌组织与正常组织间存在差异。
　　 4.应用实时定量PCR检测胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-45、MKN-28和HGC-27中HSP60的表达。
　　 5.应用ELISA法对53例胃癌及46例健康体检者血浆标本进行检测，比较不同组间HSP60表达水平的差异，运用ROC曲线评估HSP60在胃癌早期诊断中的价值，探讨HSP60在胃癌早期诊断及临床应用中的价值。
　　 结果:
　　 1.免疫组化染色结果显示，HSP60蛋白在85例胃癌患者的胃癌组织中的阳性表达率达70.5882％(60/85)，而35例癌旁正常胃组织中无表达(0/35)，二者有显著的统计学差异(P＜0.01)。HSP60的阳性表达与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度、浸润程度相关(P＜0.05)，而与年龄、性别无统计学差异(P＞0.05)。
　　 2.MVD在胃癌组织中的阳性表达率达62.3529％(60/85)，而癌旁正常胃组织中表达为低值，二者有显著的统计学差异(P＜0.01)。HSP60的阳性表达与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度、浸润程度显著相关(P＜0.05)，而与年龄、性别无统计学差异(P＞0.05)
　　 3.Spearman秩相关检验分析，HSP60蛋白和MVD表达具有显著相关性(r=0.404，P＜0.001)。
　　 4.实时定量PCR法结果显示，HSP60蛋白在20例胃癌患者的胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常胃组织中无表达，二者有显著的统计学差异(P＜0.01)。
　　 5.HSP60mRNA及在胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-45、MKN-28和HGC-27中均高表达，各细胞系之间无差异。显著高于正常组织对照(P＜0.01)。
　　 6.胃癌组血浆中HSP60(154.8pg/ml)表达水平均显著高于健康对照组(67.48pg/ml)(P＜0.001)。HSP60诊断的ROC曲线AUC为0.923，同时ROC曲线确定HSP60的诊断临界值为112.4，其诊断胃癌的敏感度为73.5％，特异度为93.5％，从而证实HSP60的应用有助于胃癌的早期诊断
　　 结论:
　　 HSP60是HSPs家族的一个重要成员，其在人类多种肿瘤均呈高表达。热休克蛋白作为一种重要的物质参与了调控肿瘤的增殖与凋亡。本研究发现HSP60在胃癌组织比正常胃粘膜组织呈明显升高趋势，且与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度、浸润程度相关。提示HSP60高表达与早期胃癌的发生密切相关，检测HSP60对早期胃癌的诊断有参考价值。
　　 近年来对肿瘤血管生成的研究表明，血管生成在实体肿瘤的恶变、生长、转移等方面起至关重要的作用，肿瘤生长所形成的血管范围直接与肿瘤转移有关，而肿瘤的微血管密度(MVD)定量地反映肿瘤的血管形成。而研究同样表明，MVD在早期胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，二者间差异具有统计学意义。应用相关分析，在胃癌组织中HSP60蛋白和MVD的具有显著相关性。胃癌组织中HSP60表达水平明显升高，并且与微血管生成密切相关密切相关。因此在临床中通过联合检测HSP60蛋白和MVD的含量，作为早期胃癌诊断及评估其预后的重要参考指标之一，并为胃癌的靶向治疗提供新的方向。
　　 通过在胃癌肿瘤标志物的研究，提示HSP60在胃癌早期诊断中有一定的优势，具有潜在的临床应用价值。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第一章 材料和方法

一 胃癌细胞系与胃癌组织标本

二 主要试剂和仪器

1．1 主要试剂

1．2 主要试剂的配制

1．3 研究所用主要仪器和设备

三 实验方法与实验步骤

1．1 HSP60分子检测

1．2 MVD检测

1．3 胃肿瘤细胞

1．4 设计引物并合成

1．5 Real-time PCR检测临床组织中HSP60基因水平上的表达

1．6 Real-time PCR检测胃癌细胞系中HSP60分子基因上的表达水平

1．7 酶联免疫法(ELISA)法检测胃癌患者和健康对照者血浆标本中HSP60分子的表达水平(依照说明书进行试验)

四 统计学分析

第二章 结果

一 HSP60蛋白分子的表达情况

二 MVD比较

三 胃癌组织中HSP60蛋白分子和MVD的相关性

四 实时定量PCR的结果显示

五 血浆中HSP60分子的表达情况

第三章 讨论

结论

参考文献

附图

附表

附件：发表论文原文

致谢

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