精子相关抗原9(SPAG9)在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义

摘要

背景:
　　宫颈癌是女性第三常见的恶性肿瘤，在恶性肿瘤死亡率中占第四位，严重威胁女性健康。并且，全球超过85％宫颈癌新发及死亡病例发生于发展中国家。宫颈癌的发生与发展是一个多阶段、多步骤、复杂的过程，从癌前病变发展为宫颈癌可经历十余年时间，故宫颈癌是一种可预防、甚至可治愈的疾病。尽管，近些年来国内外逐渐普及宫颈癌的筛查工作，虽已使宫颈癌的发病率、死亡率有明显下降，但是因宫颈液基细胞学检查特异性以及敏感性不高，并且阴道镜和宫颈活检等属创伤性检查，也存在漏诊的可能。另外，宫颈病变的术前及预后监测并不完善，目前尚没有一种可靠的肿瘤标志物检测。因此，寻找一种能为宫颈病变的早期筛查、临床诊断及术后检测提供帮助的新型肿瘤标志物显得尤为重要。
　　目的:
　　检测精子相关抗原9(SPAG9)在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)组织中的表达，并检测SPAG9在宫颈病变患者血清内的免疫原性，评估其作为新宫颈癌血清标志物的潜在价值。
　　方法:
　　1、研究对象:子宫颈病变组织及正常宫颈组织选取自山东大学附属省立医院2009年至2012年宫颈手术或活检患者标本。新鲜子宫颈癌标本40例;宫颈上皮内瘤变(CIN)患者手术后石蜡标本35例、新鲜标本7例;对照组选取20例正常宫颈组织（因非宫颈病变而手术）。另外，40例子宫颈癌、40例CIN患者血样均取自须行手术患者，另收集20例子宫颈癌术后返院化疗患者、20例子宫肌瘤患者及10例健康女性血样做为对照。
　　2、研究方法:
　　(1)应用免疫组织化学(IFC)方法，明确SPAG9在各宫颈组织中的表达定位，通过对平均光密度值的检测，比较正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织以及子宫颈癌组织中SPAG9的表达差异。
　　(2)应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测正常宫颈组织、CIN组织及宫颈癌组织中SPAG9的表达，并通过半定量分析各组间差异。
　　(3)通过Western Blot方法检测正常宫颈组织、CIN组织及宫颈癌组织中SPAG9的蛋白表达，进行半定量分析。
　　(4)应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测10例健康女性、20例子宫肌瘤患者、40例宫颈上皮内瘤变患者、40例宫颈癌患者以及20例宫颈癌术后返院化疗、无复发患者的血清标本中SPAG9浓度差异。
　　结果:
　　1、免疫组织化学结果显示，SPAG9主要定位于肿瘤细胞的细胞质和细胞膜上，间质中则极少量表达或不表达。SPAG9在正常宫颈组、宫颈上皮内瘤变组及宫颈癌组中的表达量依次增强，且各组间表达的差异均有统计学意义。但SPAG9的表达与宫颈癌临床病理学特征，无论在病理类型、组织学分型、临床分期或有无淋巴结转移等方面的表达差异均无统计学意义。
　　2、RT-PCR结果显示SPAG9在正常宫颈组织中极少表达或无表达，而在宫颈癌组织中表达量明显增高。通过对SPAG9mRNA在不同宫颈组织中表达的半定量分析显示，在宫颈癌组织中平均表达量为0.815±0.553，而在正常宫颈组织中为0.008±0.001，两组之间差异具有统计学意义。
　　3、Western Blot检测SPAG9蛋白在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达趋势，与免疫组织化学以及RT-PCR的结果一致。半定量分析SPAG9蛋白在宫颈癌组织中平均表达量为0.929±0.908，正常宫颈组织中平均表达量仅为0.044±0.032，差异有统计学意义。
　　4、ELISA结果示10名健康女性血清中SPAG9平均血清浓度3.2343±1.0579ng/mL，20例子宫肌瘤患者中为3.3561±0.7426ng/mL，两组间差异无统计学意义。而在40例宫颈上皮内瘤变及40例宫颈癌患者血清中SPAG9的平均表达量分别为6.7015±3.3101ng/mL、15.1404±10.3839ng/mL，宫颈癌组高于CIN组高于子宫肌瘤及健康女性组，且各组间的差异均有统计学意义。另外，在20例宫颈癌术后返院化疗、且无复发的患者血清中SPAG9平均浓度为3.6107±1.5069，较术前有所下降。
　　结论:
　　1、在宫颈癌和CIN组织中SPAG9的蛋白和mRNA均有高表达，且宫颈癌组高于CIN组高于正常宫颈组，三组间差异均有统计学意义。
　　2、宫颈癌及CIN患者血清中SPAG9表达量均高于正常健康女性和子宫肌瘤患者，且宫颈癌术后、未复发患者血清浓度较术前有所下降。
　　3、SPAG9作为一个新的生物学标志物，可为宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的早期诊断、术后检测、随诊治疗提供指导意义。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

三、统计学分析

结果

1、免疫组织化学结果

2、RT-PCR

3、Western Blot

4、ELISA

讨论

结论

附图表

参考文献

精子相关抗原9与肿瘤的研究进展

致谢

攻读硕士研究生学位期间发表的学术论文