Il-22介导的STAT3信号通路对小鼠急性重症胰腺炎的保护作用研究

摘要

目的：急性重症胰腺炎(acute severe pancreatitis，SAP)是临床常见急危重症之一，以病情进展快、并发症多、病死率高为特点。因其确切发病机制尚不明确，目前治疗方案多为对症处理，缺乏特异性的治疗。IL-22作为一种保护因子，在多种原因引起的肝脏、肺脏、肠道损伤等动物模型中，发挥着组织修复，维持内环境稳态的重要作用。本实验拟采用腹腔注射大剂量左旋精氨酸的方法制备小鼠SAP模型，并通过给予外源性重组IL-22，对其在小鼠SAP中的作用及机制进行初步探讨。
　　方法：60只雄性Balb/c小鼠随机分成正常对照组(NaCl组)、急性重症胰腺炎组（SAP组）、PBS治疗组（PBS组）和rIL-22治疗组（rIL-22组）。NaCl组(10只):注射等量0.9％ NaCl; SAP组（30只）:采用8％左旋精氨酸(pH=7.0)按4 g/kg体质量分2次腹腔注射;PBS组（10只）:在左旋精氨酸造模前后应用PBS（200 ng/次×5次）在相应时间点进行腹腔注射;rIL-22组（10只）:在左旋精氨酸造模前后应用rIL-22（200 ng/次×5次）在相应时间点进行腹腔注射。光镜下观察各组胰腺组织病理学改变，检测各组血清淀粉酶变化。Real-time PCR法检测各组胰腺组织中Reg3β、Reg3γ、 Bcl-2、Bcl-xL和IL-22RA1 mRNA表达水平的变化。Western blotting方法检测各组胰腺组织STAT3和P-STAT3蛋白的表达情况。并统计PBS组和rIL-22组的死亡率。
　　结果：⑴NaCl组胰腺组织结构清晰，细胞形态完整，无炎症细胞浸润;SAP组，24 h可见胰腺间质水肿，少量炎症细胞浸润，胰腺小叶呈小片状破坏，腺泡细胞坏死多发生在小叶边缘，到72h时仅见少数正常胰腺小叶呈孤岛状分布，大部分腺泡细胞被破坏，出现大片坏死区，大量炎症细胞浸润;rIL-22组小鼠胰腺水肿、坏死、炎症细胞浸润均较PBS组明显减轻。⑵NaCl组小鼠血清淀粉酶在正常范围;SAP组小鼠血清淀粉酶活性随时间推移呈现先升高后降低的趋势。rIL-22组小鼠血清淀粉酶较PBS组显著下降（P＜0.05）。⑶PBS组小鼠，死亡率达30％; rIL-22组小鼠无死亡(P＜0.05)。⑷SAP组各时间点Reg3β和Reg3γ、 Bcl-2和Bcl-xL mRNA的表达水平均低于NaCl组，并随时间延长，表达量逐渐下降。IL-22RA1 mRNA的表达在各时间点均较NaCl组升高。与PBS组相比，rIL-22组胰腺组织各基因的表达水平明显升高(P＜0.05)。⑸与PBS组相比，IL-22组胰腺组织磷酸化STAT3呈高表达。两组总STAT3表达水平无明显差异。但磷酸化STAT3与总STAT3的比值有统计学差异（P＜0.05）。
　　结论：①大剂量左旋精氨酸成功诱导了小鼠SAP模型。②外源性重组IL-22通过激活STAT3信号通路增加抗菌肽和抗凋亡基因的表达，减轻左旋精氨酸诱导的小鼠SAP。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

实验动物

实验材料

实验方法

结果

1．各组动物一般情况的观察

2．各组小鼠胰腺组织的大体观察

3．各组小鼠胰腺组织病理学改变

4．各组小鼠血清淀粉酶活性的变化

5．外源给予rIL-22对小鼠SAP死亡率的影响

6．各组胰腺组织Reg3β、Reg3γ、Bcl-2、Bcl-xk和IL-22RA1 mRNA的表达

7．胰腺组织磷酸化STAT3及总STAT3表达水平变化

讨论

结论

附图表

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文