JAK2/STAT3信号通路介导TTX心肌保护作用的实验研究

摘要

目的：探讨JAK2/STAT3信号通路在河豚毒素(tetrodotoxin，TTX)心脏停搏液保护缺血再灌注心肌中的作用及其机制。 方法：取Wistar大鼠24只，随机分成对照组、TTX组和TTX+AG490组，每组8只。对照组：开胸取左心室肌作为缺血前对照。TTX组：建立离体心脏Langendorff-Neely灌注模型，预灌注K-H缓冲液30min后，灌注4℃ TTX心脏停搏液，停搏心脏并低温维持60min，复灌K-H缓冲液60min后，取左心室肌备用。TTX+AG490组：操作同TTX组，但预灌和复灌时均在K-H缓冲液中加入JAK2抑制剂AG490(5μmol/L)。采用免疫组化法测定心肌组织中p-STAT3，Bcl-2和HSP70表达量(protem expression index，PEI)；Western blot测定心肌组织中p-STAT3含量；比色法测定心肌匀浆液中SOD活性和MDA含量；TU-NEL检测心肌细胞凋亡指数(apoptosis index，AI)。 结果：免疫组化法测定的p-STAT3 PEI在对照组、TTX组和TTX+AG490组分别是2.65±0.15％、18.19±1.68％和6.91±1.03％，提示经TTX处理后的心肌组织中p-STAT3蛋白表达较缺血前明显增加(P<0.05)，而加用AG490处理后的心肌组织中p-STAT3蛋白表达较TTX组明显下降(P<0.05)。Westem blot测定心肌组织中p-STAT3含量，结果与免疫组化一致。 Bcl-2 PEI在对照组、TTX组和TTX+AG490组分别是2.96±0.69％、23.40±1.19％和11.47±1.15％，提示经TTX处理后的心肌组织中Bcl-2蛋白表达较缺血前明显增加(P<0.05)，而加用AG490处理后的心肌组织中Bcl-2蛋白表达较TTX组明显下降(P<0.05)。 HSP70 PEI分别是对照组2.52±0.58％、TTX组22.63±1.15％和TTX+AG490组14.40±1.20％，提示经TTX处理后的心肌组织中HSP70蛋白表达较缺血前明显增加(P<0.05)，而加用AG490处理后的心肌组织中HSP70蛋白表达较TTX组明显下降(P<0.05)。 Bcl-2蛋白表达与p-STAT3蛋白表达呈正相关(r=0.743，P<0.05)，HSP70蛋白表达与p-STAT3蛋白表达亦呈正相关(r=0.826，P<0.05)。 心肌匀浆液中SOD活性(U/mgprot)在对照组、TTX组和TTX+AG490组分别是6.55±0.81、20.56±1.16和13.55±1.17，MDA含量(nmol/mgprot)分别是3.13±0.31、8.55±0.53和15.52±1.04；提示经TTX处理后的心肌匀浆液中SOD活性较缺血前显著升高(P<0.05)，MDA含量亦显著增加(P<0.05)；而加用AG490处理后的心肌匀浆液中SOD活性较TTX组显著降低(P<0.05)，MDA含量却明显增加(P<0.05)。 对照组、TTX组和TTX+AG490组的心肌细胞AI分别是1.31±0.11％、6.92±1.11％和16.21±1.40％，提示经TTX处理后的心肌细胞AI较缺血前明显增加(P<0.05)，而加用AG490处理后的心肌细胞AI较TTX组明显增加(P<0.05)。 结论：JAK2/STAT3信号通路介导了TTX心脏停搏液对缺血再灌注心肌的保护作用。其可能的机制是：TTX通过激活JAK2/STAT3信号通路，活化STAT3，上调抗凋亡蛋白Bcl-2和HSP70表达，减少心肌细胞凋亡；同时增强SOD活性，减少MDA产生，从而减轻心肌缺血/再灌注损伤。

目录

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

摘要

前言

1材料

2方法

3结果

4讨论

结论

参考文献

附图

文献综述 STAT3与心肌保护的研究进展

致谢

攻读学位期间发表论文