姜黄素在治疗过敏性鼻炎小鼠模型中的作用机制研究

摘要

目的:
　　姜黄素(Curcumin，CUR)在很多过敏性疾病的治疗中得到了很好的应用。而对过敏性鼻炎(allergic rhinitis，AR)作用机制的研究还不十分明确。本研究的目的是通过建立卵清蛋白(OVA)致敏的过敏性鼻炎小鼠模型，对其实施姜黄素干预，探讨姜黄素在过敏性鼻炎中的作用机制，为更好地治疗和护理过敏性鼻炎患者提供理论支持。
　　方法:
　　通过对试验小鼠采用腹膜内注射及鼻饲喂养OVA的方法，建立OVA致敏的过敏性鼻炎小鼠模型，在此基础上进行姜黄素鼻饲实施干预治疗，并与单纯OVA致敏组小鼠进行比较。根据实验目的，本课题中实验小鼠被分成四组:Control组（正常对照组）、OVA组（OVA致敏+鼻饲NS）、CUR1组(OVA致敏+鼻饲姜黄素100mg/kg)和CUR2组（OVA致敏+鼻饲姜黄素200mg/kg），每组6只试验小鼠。通过观察记录比较小鼠20min内打喷嚏和鼻摩擦的次数，评估姜黄素对过敏性鼻炎小鼠的鼻部症状的影响;运用HE染色观察姜黄素对致敏小鼠的鼻粘膜组织变化的影响;运用ELISA法、Western Blot法及免疫组织化学法等评估姜黄素对致敏小鼠的过敏性炎症介质及炎性因子的影响。所有数据均采用均数±标准差(SD)表示，每个实验至少重复三次，应用Prism version5软件包进行统计学分析，主要运用t检验和单因素方差分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
　　结果:
　　1.姜黄素对OVA致敏小鼠鼻部症状及鼻粘膜组织损伤的影响
　　鼻饲喂养3天后，比较各组小鼠20min内打喷嚏和鼻摩擦的频次记录。结果显示:CUR1组、CUR2组小鼠的打喷嚏和鼻摩擦数比OVA组的次数减少，并且CUR2组比CUR1组减少更加明显。运用HE染色观察姜黄素对鼻粘膜组织的影响，结果显示OVA组小鼠鼻粘膜的组织粘膜下层显示过敏性鼻炎的典型病理特征，粘膜下层含大量的炎性细胞，而CUR1、CUR2组的嗜酸性细胞的释放明显降低。结果表明姜黄素起到了减轻OVA致敏小鼠的鼻部症状，同时保护鼻粘膜免于损伤的作用。
　　2.姜黄素对OVA致敏小鼠血清标志物的影响
　　采用ELISA法，对OVA致敏小鼠血清中的过敏性介质组胺、抗OVA特异性IgE及TNF-α、Src激酶家族Fyn、Lyn以及Syk水平进行检测。检测结果显示:与OVA组相比， CUR1组和CUR2组的组胺水平、OVA特异性IgE水平、免疫细胞因子TNF-α的水平、Src激酶家族Fyn、Lyn以及Syk的血清水平均明显降低。以上结果表明姜黄素可以通过抑制血清中炎性介质的产生，从而起到抗炎症作用。
　　3.姜黄素对OVA致敏小鼠相关炎症因子的作用
　　采用ELISA法，分析姜黄素对HMC-1细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8等炎性因子释放的影响。检测结果显示:与OVA组相比， CUR1组和CUR2组中肥大细胞PMA介导的TNF-α，IL-1β，IL-6、IL-8的释放明显降低。这些结果表明姜黄素能通过抑制肥大细胞产生与过敏反应相关炎症因子而发挥抗炎作用。
　　4.姜黄素对小鼠肥大细胞中NF-κB p65核转录的作用影响
　　过敏性炎症期间，MAPK分子和作为转录因子的NF-κ B的信弓转导途径对肥大细胞炎症介质的合成和释放至关重要。本研究采用免疫印迹法对3种MAPK分子进行分析。检测结果显示:与OVA组相比，CUR1(100mg/kg)和CUR2(200mg/kg)能明显抑制PMA介导的ERK1/、P38MAPK、JNK的磷酸化，能降低细胞液中的Iκ Bα的磷酸化及肥大细胞中NF-κ B p65的核转录水平。结果表明，在肥大细胞介导的过敏性炎症中，姜黄素对MAPK/NF-κ B途径中抑制炎症介质释放存在潜在的影响。
　　结论:
　　1.姜黄素能改善OVA致敏小鼠的鼻部症状及减轻鼻粘膜的受损。
　　2.姜黄素能抑制OVA致敏小鼠血清中炎性介质的释放。
　　3.姜黄素能抑制OVA致敏小鼠与过敏反应相关的炎性因子的产生。
　　4.姜黄素能影响MAPK分子和作为转录因子的NF-κB的信号转导途经，抑制肥大细胞的炎症介质的合成和释放。

目录

声明

摘要

符号说明

第一部分 前言

1．1 研究的背景

1．2 研究问题

1．3 研究的目的和意义

1．4 研究的可行性

第二部分 文献综述

2．1 过敏性鼻炎的概念及分类

2．2 过敏性鼻炎的致病原因及流行病学调查

2．3 过敏性鼻炎的发病机制

2．4 过敏性鼻炎治疗现状

2．4．1 过敏性鼻炎的西医治疗

2．4．2 过敏性鼻炎的中医治疗

2．5 过敏性鼻炎患者护理健康教育指导

2．6 姜黄素的药理功效及临床应用进展

2．7 小结

第三部分 资料和方法

3．1 研究材料

3．1．1 试验材料

3．1．2 试验动物及分组

3．2 OVA致敏的过敏性鼻炎模型的建立

3．3 实施姜黄素干预治疗

3．4 研究工具及方法

3．4．1 鼻部症状评分

3．4．2 鼻粘膜组织和心脏组织的免疫组织化学分析

3．4．3 ELISA法(酶联免疫吸附剂测定)分析

3．4．4 肥大细胞组胺释放量的计算

3．4．5 细胞因子的测定

3．4．6 免疫印迹分析

3．5 统计学分析

第四部分 研究结果

4．1 姜黄素对OVA致敏小鼠的鼻部症状的影响

4．2 姜黄素对OVA致敏小鼠血清标志物的影响

4．3 姜黄素对肥大细胞释放的组胺和细胞因子的影响

4．4 姜黄素对肥大细胞中信号传导途径的影响

第五部分 讨论

5．1 姜黄素在OVA介导的鼻炎中发挥抑制炎性介质释放的发挥抗炎作用

5．2 姜黄素在OVA介导的鼻炎中抗炎及抗氧化作用

5．3 姜黄素对肥大细胞核转录因子NF-κB转录活性的抑制作用

第六部分 结论

第七部分 研究的局限性及启示

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文

代表性学术成果