载多西他赛胶束在克服多药耐药及靶向给药方面的研究

摘要

多西他赛，又名多西紫杉醇，是新一代紫杉烷类抗肿瘤药，其抗癌谱广，适用于多种癌症的治疗。然而，目前药物化疗效果仍不理想，一方面，由于药物自身理化性质的特点，如水溶性差，使药物不能有效地达到肿瘤组织。另一方面，肿瘤多药耐药性也是化疗失败的重要原因。再一方面，药物缺乏靶向性，引起患者严重的毒副作用，也是临床上化学治疗的主要障碍。因此，本课题制备的新剂型能够提高药物的溶解度、逆转肿瘤细胞的多药耐药，同时提高药物的靶向性，降低毒副作用。本文以PEO-PPO-PCL为主要载体材料来包载多西他赛，主要研究内容如下:
　　本文第一部分主要针对P-糖蛋白在癌细胞膜上过度表达而产生多药耐药的机理，选取TPGS为P-gp抑制剂，制备了PEO-PPO-PCL/TPGS胶束。我们合成了三种不同疏水链段的聚合物，用薄膜水化法制得的三种载多西他赛的PEO-PPO-PCL/TPGS胶束，其平均粒径分别在25-135 nm之间，符合EPR效应的粒径要求，形态呈球形，分布均匀。胶束的临界胶束浓度(CMC)低达-10-6gmL-1，在体内不会因为血液的稀释而破坏结构。载药胶束的贮藏稳定性和血浆稳定性均良好，此外，胶束还具有良好的生物相容性，溶血率均低于5％。胶束不仅增加了难溶性药物多西他赛的溶解度，而且能够控制药物的释放，体外释放试验中，载药胶束的释药与原料药相比，具有很明显的缓释作用。体内药动学实验显示，胶束能显著降低药物的消除速度，延长其体内的循环时间和作用时间，有助于药物缓释及提高生物利用度。细胞实验结果表明载药胶束对耐药细胞MCF-7/Adr显示出抑制P-gp的功能，能够逆转肿瘤细胞的多药耐药现象，胶束通过内吞进入细胞，摄取显著提高，细胞毒性比原料药明显增加，IC50实验结果显示三种胶束制剂对乳腺癌细胞MCF-7的抑制效果分别是原料药的能达到原料药的69，82和100倍。
　　本文第二部分主要针对自吞噬引起多药耐药的机理，将自吞噬抑制药氯喹与多西他赛共同包载在胶束，制成共递送给药系统。此制剂是在单载多西他赛胶束制剂基础上的扩展与改进，既抑制P-pg又抑制自吞噬，达到了双重逆转多药耐药。MTT实验筛选出当多西他赛和氯喹质量比为4∶1时，协同作用最好。对双载药胶束的载药能力、粒径、形态、溶血性等进行了系统评价。透析法研究了载药胶束在磷酸盐缓冲液(PBS pH7.4，0.5％吐温80)中的体外释药行为。此外，还评价了胶束制剂的细胞摄取;MTT法研究了双载药胶束对细胞耐药性的逆转情况，实验结果表明:所制备的胶束制剂粒径小，分散性好，溶血度低，具有缓释效果，能显著增强药物摄取，逆转肿瘤细胞多药耐药，两种胶束的逆转指数达到134.16和194.74.
　　本文第三部分主要是在PEO-PPO-PCL胶束的基础上引入叶酸，构建了载多西他赛的FA-PEG2k/PEO-PPO-PCL胶束，叶酸能够赋予胶束对肿瘤的主动识别能力以及增强胶束的跨膜转运能力，实现胶束的主动靶向性。所得胶束制剂分散度良好，呈均一的球形，平均粒径为132nm，制剂具有良好的血液相容性，溶血率低，包载的多西他赛释放缓慢，具有缓释功能。体外MTT实验结果显示在叶酸受体高表达的MCF-7细胞中，叶酸靶向胶束比普通胶束的抑制作用更显著。由此可见，叶酸修饰明显提高了胶束对叶酸受体过量表达的肿瘤细胞的亲和力，促进了药物的跨膜转运，取得了更好的药效。细胞摄取结果表明，叶酸低表达的A549细胞中，普通胶束与含叶酸靶向胶束荧光强度相近，而在叶酸高表达的MCF-7细胞中，含叶酸介导靶向胶束制剂(FA-PEG2k/P36)可以显著提高其在细胞中的摄取。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第一部分 载多西他赛PEO-PPO-PCL／TPGS胶束的制备以及其在克服多药耐药方面的研究

一、材料与仪器

1 实验试剂

2 实验仪器

第一章 PEO-PPO-PCL的性质表征及DTX的含量测定方法的建立

一、实验方法和结果

二、讨论与小结

第二章 载DTX的PEO-PPO-PCL／TPGS胶束的制备

一、实验方法与结果

二、讨论与小结

第三章 载药胶束理化性质的表征

一、实验方法与结果

二、讨论与小结

第四章 载药胶束体内药动学实验的研究

一、实验方法与结果

二、讨论与小结

第五章 载多西他赛胶束体外细胞实验

一、实验方法与结果

二、讨论与小结

第二部分 双载DTX和CQ的PEO-PPO-PCL／TPGS胶束的制备以及其在克服多药耐药方面的研究

一、材料与仪器

1 实验试剂

2 实验仪器

第一章 多西他赛与氯喹两种药物最佳比例的筛选

一、实验方法和结果

二、讨论与小结

第二章 双载药胶束的制备以及DTX和CQ检测方法的建立

一、实验方法和结果

二、讨论与小结

第三章 双载药胶束理化性质的表征

一、实验方法与结果

二、讨论与小结

第四章 双载药胶束体外抗肿瘤活性的研究

一、实验方法与结果

二、讨论与小结

第三部分 主动靶向载多西他赛FA-PEG2k／PEO-PPO-PCL胶束的制备及其研究

材料与仪器

1 实验试剂

2 实验仪器

第一章 载多西他赛FA-PEG2k／PEO-PPO-PCL胶束的制备及理化性质考察

一、实验方法和结果

二、讨论与小结

第四章 载多西他赛FA-PEG2k／PEO-PPO-PCL的体外抗肿瘤活性评价

一、实验方法与结果

二、讨论与小结

全文结论

参考文献

致谢

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