马齿苋酚性成分的分离及马齿苋酰胺E的药代动力学研究

摘要

本研究利用各种柱色谱方法(包括正相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、MCI色谱柱以及半制备型HPLC)对物质进行分段、纯化，利用碳谱(13C NMR)、氢谱(1H NMR)、二维谱HSQC、HMBC和高分辨质谱(HR-ESI-MS)数据鉴定结构，从马齿苋60％乙醇提取液经聚酰胺柱色谱洗脱的多酚部位分离鉴定了12个化合物:香草醛（香兰素，vanillin，1）、对羟基苯甲醛(4-羟基苯甲醛，p-hydroxybenzaldehyde，2)、原儿茶醛（3，4-二羟基苯甲醛protocatechualdehyde，3）、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid，4)、阿魏酸(3-甲氧基-4-羟基肉桂酸，ferulicacid，5)、对羟基苯乙酸甲酯(methyl4-hydroxyphenylacetate，6)、异香兰酸(3-羟基-4-甲氧基苯甲酸，isovanillic acid,7)、咖啡酸（3，4-二羟基肉桂酸，caffeic acid，8）、反式对羟基肉桂酸（3-（4-羟基苯基）-2-丙烯酸，trans-p-hydroxycinnamic acid,9）、iseluxine(10)、马齿苋酮(portulacatone，11)与马齿苋酰胺E(oleraceinE，简称OE，12)。11是一个新酚性生物碱，1、2、3、6、10这五个化合物是第一次从马齿苋分到。马齿苋酮(portulacatone，11)和iseluxine(10)清除DPPH自由基能力随着化合物浓度增加而升高，其EC50值分别为14.63μM和9.98μM，强于天然抗氧化剂VC(EC50=20.72μM)。
　　马齿苋酰胺E(OE)的理化性质研究:(1)建立了溶液中OE的HPLC-UV检测方法:色谱柱[Inertsil ODS-3(4.6×250 mm，5μm)]，保护柱(4.0×3.0 mm，5μm);流动相为甲醇-0.1％甲酸(32∶68)，流速f=1 mL/min，波长λ=287 nm，柱温T=30℃。(2)测定了OE在几种常见的溶剂、不同pH磷酸盐缓冲液中37℃时的平衡溶解度，结果表明，OE在不同溶剂中的平衡溶解度从低至高依次为石油醚（不溶）、氯仿(36.9976μg/mL)、乙酸乙酯(132.4791μg/mL)、正辛醇(410.2657μg/mL)、水(525.0000μg/mL)、乙腈(632.0947μg/mL)、正丁醇(1337.3675μg/mL)、乙醇(2573.9049μg/mL)、甲醇(5125.1133μg/mL)。在pH2、4、5.8缓冲液中的平衡溶解度分别为487.3359μg/mL、472.0468μg/mL、483.9740μg/mL。(3)测定了OE在不同pH(2/4/6.8/7.4/8)磷酸盐缓冲液中和不同温度(25℃，37℃，50℃)条件下的稳定性。据实验结果得出结论:OE在pH2、4缓冲液里9h内稳定;在pH6.8/7.4/8（中性、碱性磷酸盐缓冲液）里，OE逐渐降解，并且温度、pH升高，降解速度变大。(4)油水分配系数测定结果显示，OE在正辛醇/水和正辛醇/pH2/4/5.8/6.8磷酸盐缓冲液的油水分配系的对数logP分别为0.520、0.552、0.575、0.567、0.597。
　　OE的药代动力学研究:(1)建立了血浆中OE的HPLC-UV检测方法:TSKgelODS-3色谱柱(4.6×250 mm，5μm)，保护柱(4.0×3.0 mm，5μm)，柱温T=35℃，甲醇-0.1％甲酸(28∶72)为流动相，流速0.8 mL/min，检测波长为287 nm;进行了专属性、线性、回收率、精密度、稳定性、LOD、LOQ几项方法学考察。(2)测定了Wistar雄性大鼠灌胃和尾静脉给药OE后的药时曲线，通过DAS1.0软件非房室模型分析得到了各自的统计矩参数。灌胃给OE（10.5 mg/kg体重）的药代动力学参数: AUC(0-∞)=14.91±6.11μg/mL*min，Cmax=0.31±0.11μg/mL，Tmax=15min，t1/2z=23.90±9.86 min;尾静脉注射给OE(6.4 mg/kg体重)的药代动力学参数:AUC(0-∞)=23.20±11.78μg/mL*min, Cmax=3.14±1.92μg/mL, Tmax=2 min,t1/2z=3.90±0.68 min，大鼠灌胃OE的绝对生物利用度为39.17％。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 文献综述

1．1 马齿苋酚性成分研究进展

1．1．1 简单酚类

1．1．2 黄酮

1．1．3 酚性生物碱

1．1．4 香豆素

1．2 OE类似物左旋多巴的药代动力学研究

1．2．1 结构改造对左旋多巴药代动力学的影响

1．2．2 剂型不同对左旋多巴药代动力学的影响

1．2．3 联合用药对左旋多巴药代动力学的影响

1．2．4 个性化用药对左旋多巴药代动力学的影响

1．2．5 左旋多巴的测定方法

1．3 选题依据

参考文献

第二章 马齿苋酚类化合物的分离鉴定及其抗氧化活性研究

2．1 前言

2．2 结构鉴定

2．3 化合物提取与分离

2．3．1 马齿苋药材

2．3．2 试剂和仪器

2．3．3 提取分离流程

2．4 化合物的理化性质与波谱数据

2．5 化合物清除DPPH自由基的活性测定

2．5．1 实验材料和仪器

2．5．2 溶液配制

2．5．3 清除DPPH自由基活性测定

2．6 小结

参考文献

第三章 OE的理化性质测定

3．1 前言

3．2 实验试剂和仪器

3．3 缓冲溶液的配制

3．4 方法

3．4．1 色谱条件

3．4．2 方法学考察

3．4．3 测定OE在不同溶剂中的溶解度

3．4．4 测定OE在不同pH磷酸盐缓冲液中的溶解度

3．4．5 不同温度下OE在不同pH磷酸盐缓冲液中的降解曲线

3．4．6 测定OE的正辛醇-水分配系数

3．5 实验结果

3．5．1 溶液中OE的HPLC含量测定方法

3．5．2 方法学考察结果

3．5．3 OE在不同溶剂中的溶解度

3．5．4 OE在不同pH磷酸盐缓冲液中的溶解度

3．5．5 不同温度下OE在不同pH缓冲液中的降解曲线

3．5．6 OE在正辛醇-水系统中的油水分配系数

3．6 小结

参考文献

第四章 马齿苋酰胺E(OE)在大鼠体内的药-时曲线研究

4．1 实验材料和仪器

4．1．1 试剂

4．1．2 仪器

4．1．3 动物

4．2 方法

4．2．1 溶液配制

4．2．2 血浆样品的采集及制备

4．2．3 血浆样品中OE的HPLC含量测定方法的建立

4．2．4 大鼠灌胃OE的药-时曲线测定

4．2．5 大鼠静注OE的药-时曲线测定

4．2．6 绝对生物利用度

4．3 实验结果

4．3．1 血浆蛋白沉淀试剂

4．3．2 内标

4．3．3 血浆样品稳定剂

4．3．4 方法学考察结果

4．3．5 灌胃OE的药时曲线

4．3．6 静注OE的药时曲线

4．3．7 绝对生物利用度

4．4 讨论

参考文献

致谢

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附录