牙龈干细胞治疗小鼠放射性口炎机理的初步探讨

摘要

目的:
　　放射性口腔黏膜炎在头颈部肿瘤患者放疗术后的发生率极高，对患者的近远期疗效与生活质量造成了严重影响;牙龈间充质干细胞作为一种新的前体细胞，具备有同骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞等其余干细胞类似的特性，更有其不可比拟的优势。本实验将牙龈间充质干细胞应用于小鼠放射性口腔黏膜炎的治疗中，旨在探讨牙龈间充质干细胞在该治疗过程中的机理，为放射性口腔黏膜炎的防治提供新的科研思路与临床依据。
　　方法:
　　1、酶解法分离培养GFP+-C57/BL转基因小鼠牙龈间充质干细胞(gingiva-derivedmesenchymal stem cells,GMSCs)。
　　2、选取60只6-8周C57/BL小鼠随机分为以下3组:
　　(1) GMSC对照组:不放射，通过小鼠尾静脉注射106个GMSCs。
　　(2)放射治疗组:通过simens Primus电子直线加速器给予小鼠25Gy放射剂量/只，放射后3天通过小鼠尾静脉注射106个GMSCs。
　　(3)放射对照组:通过siemens Primus电子直线加速器给予小鼠25Gy放射剂量/只，放射后3天通过小鼠尾静脉注射无细胞培养基DMEM。
　　3、建立C57/BL小鼠放射性口炎模型:采用siemens Primus电子直线加速器，以每只小鼠单次25Gy剂量进行放射，根据临床症状与组织学表现确定模型建立。
　　4、观察GMSCs在小鼠唇、舌组织中归巢，检测唇、舌组织中相关因子变化
　　(1) GMSC对照组:小鼠注射GMSCs后3天、7天、10天取唇、舌组织固定、包埋后通过免疫组化检测细胞归巢。
　　(2)放射治疗组:小鼠注射GMSCs后3天、7天、10天取唇、舌组织固定、包埋后通过免疫组化检测细胞归巢;同时ELISA法检测局部组织中IL-6、IL-10、SDF-1的表达。
　　(3)放射对照组:小鼠注射DMEM后3天、7天、10天取唇、舌组织，ELISA法检测局部组织中IL-6、IL-10、SDF-1的表达。
　　结果:
　　1、分离培养出C57/BL小鼠GMSCs。
　　2、小鼠放射性口炎模型唇、舌组织中GMSCs细胞归巢的免疫组化结果:GMSC对照组小鼠组织未观察到明显的GFP+细胞归巢;放射对照组小鼠组织上皮层可观察到GFP+细胞归巢，以注射后3天数量最多，注射后7天、10天数量递减。
　　3、小鼠局部组织中IL-6、IL-10、SDF-1水平变化:
　　注射后3天、7天、10天，放射治疗组唇、舌IL-6水平均较放射对照组降低(p＜0.05)，放射治疗组唇、舌IL-10水平均较放射对照组升高(p＜0.05)，放射治疗组唇、舌SDF-1水平均较放射对照组升高(p＜0.05);
　　结论:
　　系统应用GMSCs治疗小鼠放射性口炎，可能通过升高局部组织中SDF-1，从而促进GFP+GMSCs归巢于唇、舌上皮层，同时促炎因子IL-6降低，抑炎因子IL-10升高，达到治疗效果。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．实验设备

2．实验材料与试剂

3．实验方法

结果

1．大体观察

2．GMSCs归巢检测

3．IL-6、IL-10、SDF-1因子表达

讨论

1．放射性口炎的致病机制、病理生理及现况

2．实验性RTOM模型的建立

3．牙龈间充质干细胞对小鼠放射性口炎的作用

全文结论

参考文献

致谢