NELL-1与BMP2联合应用在大鼠牙髓损伤修复中的体内研究

摘要

目的:
　　Nel-like分子-1(NELL-1)是一种新型生长因子，可诱导成骨细胞的分化和骨再生。近期有研究表明，NELL-1蛋白可协同增加骨形成蛋白-2(BMP2)的骨形成及骨诱导作用，并抑制由BMP2蛋白导致的炎症及肿胀等不良反应。牙齿和颅骨均来源于神经嵴，两者的蛋白表达谱也具有许多相类似的地方。我们课题组以前的研究结果表明，Nell-1蛋白可以在成牙本质细胞的分化及牙本质的形成中发挥重要作用，本课题的研究目的旨在检测NELL-1蛋白与BMP2蛋白在修复牙髓损伤时是否也具有协同作用，同时，本研究还讨论了NELL-1和BMP2联合应用对牙髓损伤修复和再生的影响。
　　材料和方法:
　　1、选取Wistar大鼠健康、无龋坏的上颌第一磨牙建立牙髓损伤模型。将暴露的牙髓用400ng/ml、500ng/ml、600ng/ml、700ng/ml的NELL-1蛋白（无菌胶原海绵为载体）进行盖髓。2周后通过苏木精-伊红(HE)染色检测修复性牙本质形成的效果，确定NELL-1蛋白的最低有效作用浓度。
　　2、选取60只Wistar大鼠的上颌第一磨牙构建牙髓损伤模型。随机分为5组分别进行盖髓:(1)对照组:空白胶原海绵组;(2)Dycal组;(3)700ng/ml BMP2蛋白+胶原海绵组;(4)700ng/ml NELL-1蛋白+胶原海绵组;(5)700ng/ml NELL-1+700ng/ml BMP2组。1周、2周和4周后，将大鼠处死。
　　3、利用HE染色观察各组修复性牙本质的形成，免疫组化染色观察修复性牙本质相关特异性蛋白牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达。
　　4、通过qRT-PCR以及免疫组化染色检测牙髓炎性因子白细胞介素6(IL6)和白细胞介素8(IL8)在mRNA和蛋白质水平的表达。
　　结果:
　　1、与其他浓度相比，700ng/ml的NELL-1蛋白是诱导大鼠牙髓修复性牙本质形成的最低有效作用浓度。
　　2、HE染色结果显示NELL-1与BMP2蛋白联合应用的大鼠牙髓具有更早和更明显的管状修复性牙本质形成。在1周时，NELL-1与BMP2蛋白联合盖髓的标本开始形成短而不规则的管状修复性牙本质;2周时，NELL-1与BMP2蛋白联合盖髓的标本所形成的修复性牙本质内含有丰富的牙本质小管，与周围自然的牙本质相类似;4周时，NELL-1与BMP2蛋白联合盖髓的标本在穿髓孔下方表现出更明显的牙本质桥形成。
　　3、免疫组化染色显示NELL-1+BMP2组的DSPP表达强于对照组(p＜0.01)、Dycal组（1和4周时p＜0.01，2周时p＜0.05）和BMP2组（1周时p＜0.01，4周时p＜0.05）。
　　4、与其他组相比，NELL-1与BMP2蛋白联合应用在大鼠牙髓中表现出较轻的炎性细胞反应。免疫组化染色发现，NELL-1+BMP2组能够抑制IL6和IL8的阳性表达。qRT-PCR实验也得到了相同的结果，与其它组相比，NELL-1+BMP2组在各时间点IL6和IL8表达水平均有显著下调(p＜0.01)。
　　结论:
　　1、成功建立大鼠牙髓损伤模型，首次发现联合应用NELL-1与BMP2蛋白进行盖髓能更早形成更明显的管状修复性牙本质，且NELL-1+BMP2组的牙本质形成特异性蛋白DSPP阳性表达更强，提示NELL-1和BMP2蛋白联合应用对牙髓损伤有更好的修复作用。
　　2、NELL-1与BMP2蛋白联合应用能够抑制大鼠牙髓中炎症因子IL6和IL8在mRNA及蛋白质水平的表达，提示NELL-1与BMP2蛋白联合应用可以抑制早期牙髓炎的发展。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第一部分 NELL-1与BMP2联合应用对修复性牙本质形成的影响

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

第二部分 NELL-1与BMP2联合应用对牙髓炎症因子表达的影响

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

第三部分 全文结论及展望

一、全文结论

二、展望

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文