声明
摘要
符号说明
1．1引言
1．1．1 H2S和硫烷硫的介绍
1．1．2硫氧化途径
1．2硫氧化途径的调控因子
1．2．1 BigR(biofilm growth-associated repressor)生物膜生长抑制子
1．2．2 CstR(CsoR-like sulfurtransferase repressor)类铜敏感操纵子阻遏蛋白的硫转移酶抑制子
1．2．3 SqrR(Sulfide：quinone reductase Repressor)硫醌氧化还原酶抑制子
1．2．4 FisR(Fis family transcriptional Regulator)Fis家族调控子
1．3地衣芽孢杆菌
1．3．1地衣芽孢杆菌的特性
1．3．2地衣芽孢杆菌与硫化物的关系
1．4双组分系统(Two-com ponent Regulatory System，TCS)
1．4．1双组分系统的机制
1．4．2 NreB-NreC组成的双组分系统的介绍
1．5本论文的研究内容和意义
第二章YrkD和NreBC的调控功能的研究
2．1实验材料
2．1．1菌株和质粒
2．1．2本章所用的引物
2．1．3试剂和试剂盒
2．1．4仪器设备
2．1．5培养基和缓冲液
2．2实验方法
2．2．2热激法感受态细胞的制备(Inoue法)
2．2．3敲除质粒的构建
2．2．4敲除菌株的构建
2．2．5构建NreB单Cys突变株
2．2．6 H2S消耗的测定
2．2．7硫化物的检测方法(亚甲基蓝，methylene blue，MB法)
2．2．8 H2S消耗检测条件的优化
2．3结果和讨论
2．3．1生物信息学分析
2．3．2 H2S消耗检测方法的优化
2．3．3双组分系统NreBC的调控作用
2．3．4 YrkD的调控功能分析
2．3．5 sqr基因的转录受到了NreBC和YrkD的双重影响
2．3．4 NreB单Cys突变的影响
2．4本章小结
第三章硫氧化相关基因的转录分析
3．1实验材料
3．1．1菌株和质粒
3．1．2本章所用的引物
3．1．3本章主要试剂
3．2实验方法
3．2．1提取MW3的RNA
3．2．2反转录成cDNA
3．2．3共转录分析
3．2．5 5’RACE扩增引物分析
3．4结果与讨论
3．4．1共转录分析
3．4．2 nreC和pdo的转录水平都受到YrkD调控的影响
3．4．3 sqr-pdo是独立的操纵子并且仍受到YrkD和NreBC的调控
3．4．4 5’RACE分析转录起始位点
3．4．5 NreC结合位点的预测
3．4本章小结
第四章YrkD和NreB感应信号的研究
4．1实验材料
4．1．1菌株和质粒
4．1．2本章所用的引物
4．2实验方法
4．2．1荧光报告系统的构建
4．2．2不同硫化物的诱导及荧光检测
4．2．3不同浓度硫化物的诱导及荧光检测
4．3实验结果
4．3．1 YrkD的感应信号的研究
4．3．2 NreBC感应的诱导底物分析
4．4本章小结
第五章全文总结与展望
参考文献
致谢
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