一贯煎对H2O2诱导L02细胞DNA氧化损伤的修复作用机制研究

摘要

目的探讨一贯煎对过氧化氢(H2O2)诱导的人正常肝细胞(L02)DNA氧化损伤的修复机制。方法将L02细胞随机分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、一贯煎小剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎大剂量组及阳性对照组,每组各5只。正常对照组及模型对照组均加入含有20%正常大鼠血清的培养基,一贯煎小剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎大剂量组及阳性对照组分别加入20%一贯煎小剂量含药血清、20%一贯煎中剂量含药血清、20%一贯煎大剂量含药血清以及含有20%正常大鼠血清且Vc浓度为0.1 mmol/L的培养基。孵育24 h后,除正常对照组外,其余各组加入浓度为0.6 mmol/L的H2O2处理1 h。通过CCK-8检测氧化损伤细胞的活力;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DNA氧化损伤的标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)含量;流式细胞术检测活性氧(ROS)含量和细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞ATM、CHK2、Cdc25A、Cdc25C的mRNA表达情况。结果L02细胞活力随着H2O2浓度增高及作用时间延长而降低(P<0.05);与正常对照组比较,模型对照组细胞活力下降(P<0.05);8-OHDG含量增加(P<0.05);ROS平均荧光强度显著增加(P<0.05);G1期细胞比例减少,S期、G2/M期细胞比例增加(P<0.05);ATM、CHK2的mRNA表达上调,Cdc25A、Cdc25C的mRNA表达下调(P<0.05)。与模型对照组比较,一贯煎小剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎大剂量组及阳性对照组细胞活力提高(P<0.05);8-OHDG含量减少(P<0.05);ROS平均荧光强度降低(P<0.05);G1期细胞比例增加,S期、G2/M期细胞比例减少(P<0.05);ATM、CHK2的mRNA表达下调,Cdc25A、Cdc25C的mRNA表达上调(P<0.05)。结论一贯煎可能通过抑制ATM/CHK2/Cdc25A/Cdc25C通路影响细胞周期进而修复L02细胞DNA氧化损伤。