16SrRNA检测在螺杆菌感染与肝癌相关性研究中的应用

摘要

目的 采用分子生物学技术,从分子水平上通过检测螺杆菌16SrRNA基因,探讨螺杆菌感染与原发性肝癌(HCC)之间的相关性,为原发性肝癌病因和发病机制提供新的思路,同时对原发性肝癌的临床诊断和防治开辟新的途径.方法①从Genebank基因文库中下载已知所有螺杆菌属16SrRNA序列,利用DNAstar软件包与大肠埃希菌、溶血链球菌和嗜肺巴氏菌的16SrRNA的高保守区序列比较,优化并设计出一对属特异螺杆菌共用引物、反应参数和一个属特异螺杆菌DNA探针,分别用于PCR扩增和Southern杂交确认.②选择术后原发性肝癌组织15例为实验组;胃癌、非原发性肝癌、结直肠癌和子宫肌瘤各15例为对照组.原发性肝癌组和胃癌组癌组织块一部分制成匀浆提取DNA,用于PCR和Southern实验,另一部分和其它对照组制作病理切片用于原位杂交实验.③合成Battle设计的肝螺杆菌(Hh)、幽门螺杆菌(Hp)、H.Fennelliae (Hf)16SrRNA-cDNA特异探针和该室设计的属特异螺杆菌16SrRNA-cDNA共用探针,利用地高辛3'-末端标记法标记探针,检测各组切片标本16SrRNA-mRNA的表达.④对经PCR扩增、Southern杂交和原位杂交确认的原发性肝癌组阳性标本DNA进行序列测定,以验证螺杆菌感染类型.结论 ①经PCR扩增和Southern杂交确认结果显示,在原发性肝癌和胃癌组织中均检出16SrRNA基因,表明两种肿瘤可能均伴有螺杆菌感染.②原位杂交法检测16SrRNA-mRNA表达和16SrRNA基因序列测定证实,阳性标本均为幽门螺杆菌(HP)感染,提示幽门螺杆菌感染可能与原发性肝癌的发生有相关性.③原发性肝癌组未检出肝螺杆菌16SrRNA基因和肝螺杆菌16SrRNA-mRNA表达.

目录

文摘

英文文摘

1前言

2材料和方法

2.1材料、试剂和设备

2.2实验方法

3结果

3.1 PCR扩增产物结果

3.2 Southern杂交结果

3.3原位杂交

3.4 DNA序列测定与比对结果

4讨论

4.1利用PCR技术检测原发性肝细胞癌患者螺杆菌16SrRNA

4.2利用Southern杂交验证PCR结果

4.3用原位杂交技术检测原发性肝癌患者16SrRNA-mRNA

4.4序列测定与比对分析

5小结

参考文献

致谢

综述 螺杆菌感染与消化道疾病