肝癌组织中螺杆菌感染及相关基因检测研究

摘要

目的:通过细菌培养、电镜技术、PCR扩增螺杆菌属16SrRNA基因和相关功能基因等分子生物学技术，探讨螺杆菌感染与人类原发性肝癌(HCC)的相关性。 方法:1、选取38例HCC患者的肝癌组织为实验组，28例其他肝病患者肝组织和29例胃癌患者胃癌组织、18例结直肠癌、18例子宫肌瘤作对照组。2、应用哥伦比亚培养基分离培养癌组织中的螺杆菌，并对培养阳性标本进行 G染色、投射电镜(TEM)观察和尿素酶检测鉴定，扫描电镜(SEM)观察癌组织中细菌形态、位置。3、采用聚合酶链反应(PCR)检测螺杆菌属16SrRNA基因，用螺杆菌属特异探针、Hp、Hh和Hf种特异性J6SrRNA-cDNA探针对各组16SrRNA的扩增产物经Southem杂交确认，并进行测序及同源性比较。4、检测Hp的特异基因26- kDa及相关功能基因cagA、vacA、rps4、glmM。通过以上方法综合评价螺杆菌感染与HCC的相关性。 结论:1、HCC患者肝组织中存在螺杆菌感染且感染率较高。2、螺杆菌感染与原发性肝癌可能存在相关性。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章材料和方法

1.1材料、试剂和设备

1.1.1主要实验试剂

1.1.2主要实验设备

1.2实验方法

1.2.1实验分组与技术处理

1.2.2螺杆菌培养

1.2.3细菌DNA提取与透射电镜观察

1.2.4扫描电镜观察螺杆菌

1.2.5 PCR扩增

1.2.6 Southern杂交

1.2.7实验结果的统计学处理

第二章结果

2.1细菌培养

2.2扫描电镜

2.3 16SrRNA基因扩增、Southern杂交结果

2.4 DNA序列测定与对比结果

2.5特异和相关功能基因检测结果

第三章讨论

第四章小结

参考文献

综述 螺杆菌感染与肝脏疾病的相关性研究

攻读学位期间的研究成果

附录

致谢