腺相关病毒介导的hTGFβ1和hTGFβ3双基因联合体内转染逆转兔退变椎间盘的生物学效应

摘要

目的：制造兔椎间盘退变模型；应用腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)介导人转化生长因子β1(human transforming growth factor-β1，hTGF-β1)、hTGF-β3基因体内转染兔退变椎间盘，观察目的基因的表达以及单基因转染或双基因联合转染对退变髓核细胞的生物学作用。 方法：成年新西兰大白兔通过注射纤维结合素片段(fibronectin fragment，Fn-f)制造椎间盘退变模型，造模后2、4、8、12周分别进行影像学、形态学、组织学检测，观察造模椎间盘变化。将造模成功动物随机分为4组，各组分别于造模髓核内注射rAAV2-hTGFβ1、rAAV2-hTGFβ3、rAAV2-hTGFβ1+rAAV2-hTGFβ3、rAAV2-EGFP(enhanced green fluorescent protein，EGFP)，自身对照组椎间盘内注射磷酸盐缓冲液PBS。手术后4、8、12周时，收获各组髓核组织作组织培养或裂解，蛋白多糖的合成由35S硫酸盐结合率来测定，免疫印迹Western-Blot法检测髓核Ⅱ型胶原的含量。分别于术后1周、12周观察hTGF-β1和EGFP的表达。 结果：(1)退变椎间盘内注射rAAV2-hTGFβ11周后，髓核中hTGF-β1含量较注射PBS椎间盘显著增多；注射rAAV2-EGFP椎间盘，术后12周仍可观察到EGFP的表达。(2)基因转染后4周、8周、12周，转染。rAAV2-hTGFβ1组、rAAV2-hTGFβ3组和双基因联合转染组髓核组织Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达均较自身PBS组增高，各组均有显著差异。转染rAAV2-EGFP组同自身对照PBS组比较没有显著差异；(3)造模后4、8、12周，双基因联合转染组椎间盘Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达高于单基因转染椎间盘，有显著差异。 结论：rAAV2介导的hTGFβ1和hTGFβ3转染退变的椎间盘髓核细胞后，hTGFβ1和hTGFβ3可持续表达12周，并可有效的促进退变椎间盘蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成；双基因联合转染具有协同效应。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分椎间盘退变动物模型的制造

第二部分hTGFβ1和hTGFβ3单基因或双基因联合转染兔退变椎间盘的生物学效应

讨论

小结

参考文献

文献综述

攻读学位期间发表的论文及参加的研究项目、科研奖励

附录

致谢

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