卡介苗与灭活卡介苗对机体免疫功能的影响及抗白血病作用的研究

摘要

第一部分 目的:探讨卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)对急性白血病患儿外周血来源树突状细胞(dendritic cell，DC)体外扩增的影响，并对卡介苗与灭活卡介苗(Non-viable Bacillus Calmette-Guerin，NV-BCG)的作用进行比较。 方法:采用Ficoll-Hypaque法分离急性白血病患者外周血单个核细胞(PBMNC)，将本实验分为分为6组①对照组（仅加入RPMI1640完全培养液+1×106个单个核细胞）；②BCG组(与对照组等量的单个核细胞+BCG3×104cfu);③NV-BCG组(与对照组等量的单个核细胞+NV-BCG3×104cfu)；④GTI组(与对照组等量的单个核细胞+thGM-CSF100 ng/ml、thTNF-α10 ng/ml、IL-450 ng/ml)；⑤GTIB组(与对照组等量的单个核细胞十与GTI组等量的细胞因子+BCG3×104cfu)；⑥GTINB组(与对照组等量的单个核细胞十与GTI组等量的细胞因子+NV-BCG3×104cfu)，培养至第9天，对各组细胞进行计数，应用流式细胞仪检测各组细胞免疫表型，并行瑞氏一姬姆萨染液染色，在油镜下观察各组细胞的形态。 结论: 1、BCG能促进树突状细胞的增殖，但其促进树突状细胞增殖的能力弱于细胞因子的联合作用。 2、BCG不仅能促进白血病患儿外周血树突状细胞的体外扩增，还能协同细胞因子促进其成熟。 3、NV-BCG在促进树突状细胞增殖及树突状细胞成熟方面与BCG无明显差异。 第二部分 目的:探讨卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)对急性白血病患儿外周血树突状细胞功能的影响，并对卡介苗与灭活卡介苗(Non-viable Bacillus Calmette-Guerin，NV-BCG)进行比较。 方法:应用Ficoll-Hypaque法分离急性白血病患者外周血单个核细胞(PBMNC)，分为5组：①对照组（GTI组）（1×106/mlPBMNC+thGM-CSF100ng/ml，thTNF-α10ng/ml，thIL-450ng/ml）；②BCG组(与对照组等量PBMNC+BCG3×104cfu)；③NV-BCG组(与对照组等量PBMNC+NV-BCG3×104cfu);④GTB组（与对照组等量PBMNC+与对照组等量的细胞因子+BCG3×104cfu）；⑤GTINB组(与对照组等量PBMNC+与对照组等量的细胞因子+NV-BCG3×104cfu)。光学显微镜下每日观察DC的形态，培养9天后收获DC，而后将DC与儿童急性白血病同种异体外周血淋巴细胞混合反应96h后观察淋巴细胞的增殖情况，ELISA方法检测上清中其IL-12、IFN-γ的分泌情况，另将培养9天后的HL-60抗原致敏后的DC与已培养7天的淋巴细胞及HL-60细胞共孵育72h，观察不同组别DC对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤HL-60细胞活性影响的不同。MTT法检测其杀伤活性。 结论: 1、BCG诱导后的DC能促进T细胞的增殖和分泌，且随着刺激细胞数目的增加，T细胞扩增能力进一步增强；其杀伤白血病细胞活性较GTI组增强。提示BCG能够促进DC的成熟，增强DC抗原提呈能力，从而增强急性白血病患儿外周血来源树突状细胞介导的抗白血病免疫效应。 2、BCG联合细胞因子应用后能促进T细胞的增殖和分泌，使T细胞杀伤白血病细胞活性的效果更为明显。 3.NV-BCG能诱导DC产生，并促进T细胞的增殖分泌及杀伤HL-60细胞的活性，与BCG无明显差异。 4.急性白血病患儿外周血单个核细胞能诱导出DC，在DC作用下T淋巴细胞能产生一定量的IL-12、IFN-Y，并能有效的杀伤白血病细胞，

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词索引表

声明

第一部分 卡介苗与灭活卡介苗对白血病患儿外周血树突状细胞体外扩增的影响

引言

第一章 材料和方法

1.1材料

1.2方法

第二章结果

2.1 DC形态学观察

2.2各组细胞计数

2.3细胞免疫表型

第三章讨论

第四章结论

参考文献

第二部分 卡介苗与灭活卡介苗对白血病患儿外周血树突状细胞功能影响的研究

引言

第一章 材料和方法

1.1材料

1.2方法

第二章结果

2.1 DC的形态

2.2混合淋巴细胞反应

2.3 Dc介导的特异性抗白血病细胞毒效应

第三章讨论

第四章结论

参考文献

综述 残留白血病的免疫治疗

攻读学位期间的研究成果

致谢