张应力刺激对大鼠髁突软骨细胞col-Ⅱ和AGG mRNA表达影响的实验研究

摘要

目的:髁突软骨是正畸临床上功能矫形治疗的主要“靶点”之一,在矫形力的作用下其能否发生适应性改建在很大程度上决定着功能矫形治疗的成败,一直被国内外学者所关注。我们的实验先对SD大鼠颞下颌关节髁状突软骨细胞进行原代培养,探讨周期性张应力对髁突软骨细胞_主要细胞外基质Ⅱ型胶原(type-Ⅱcollagen Col-Ⅱ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan AGG)合成的影响,为治疗给予一定理论上的依据。
　　 方法:①SD大鼠颞下颌关节髁状突软骨细胞体外环境培养与细胞鉴定:取2周龄的SD大鼠20只断颈处死后应用机械分离.酶消化联合法分离双侧髁突软骨细胞进行原代体外培养,甲苯胺蓝染色证明所培养的细胞合格。②周期性张应力刺激模型建立与Col-Ⅱ、AGG mRNA半定量分析:采用细胞牵张加力仪器对所培养的细胞(第3代)分别加力0h、1h、6h、12h和24h的周期性张应力,应力拉伸率为10%1HZ。加过力后将不同加力组的细胞非别放置,提取加力细胞的总RNA,反转录PCR技术测定主要细胞外基质Col-Ⅱ和AGG表达变化情况。
　　 结果:①采用机械分离-酶化学消化联合法获得数量足够的颞下颌关节髁状突软骨细胞,经过细胞特异表型的观察,确认我们的细胞是想要的大鼠颞下颌关节髁状突软骨细胞。②半定量PCR显示:与对照组(0h组)相比,加力1h时Col-Ⅱ和AGG的表达均增加;加力6h时Col-Ⅱ和AGG表达均显著增加(p<0.05);细胞加力的时间到12h时Col-Ⅱ和AGG表达均开始下降;当加力至24h时二者表达量均显著降低(p<0.05)。
　　 结论:①采用机械-酶化学联合法完全可以消化得到大鼠颞下颌关节髁状突软骨细胞。②Col-Ⅱ、AGG等主要的细胞外的基质明显受到周期性张应力刺激的影响。③适宜时间的张应力刺激可增强Col-Ⅱ、AGG的合成有利于髁突软骨细胞的增殖及改建;过长时间的张应力刺激使基质的合成受到明显抑制不利于髁突软骨的改建。