辐射应激对小鼠T淋巴细胞的作用及香菇多糖的干预机制研究

摘要

目的:
　　 研究香菇多糖对辐射所致小鼠免疫应激损伤的保护作用。从整体水平验证香菇多糖的防护干预作用，并从细胞及分子水平探讨香菇多糖该作用的机制。
　　 方法:
　　 1.实验模型建立与分组:①辐射损伤模型的建立:辐射条件:全身性辐射，吸收剂量为40 cGy/d，吸收剂量率为300 cGy/min，皮源距为150 cm，照射野为20 cm×20 cm，连续照射30d。②实验分组:实验小鼠分为五组，分别为:辐射模型组、正常对照组、香菇多糖高剂量组、香菇多糖中剂量组和香菇多糖低剂量组。
　　 2.T淋巴细胞提取:应用尼龙毛柱法从小鼠脾脏提取T淋巴细胞。
　　 3.NO含量测定:按照试剂盒说明书要求进行操作，测定不同组别小鼠T淋巴细胞分泌NO含量。
　　 4.IL-2含量测定:按照剂盒说明书要求进行操作，测定不同组别小鼠T淋巴细胞分泌IL-2含量。
　　 5.RNA提取:按照试剂盒说明书要求，从小鼠T淋巴细胞中提取mRNA。
　　 6.RNA逆转录合成cDNA:按照试剂盒说明书要求，从提取出的RNA合成cDNA。
　　 7.cDNA扩增:按照试剂盒说明说要求，采用荧光染料嵌合法，配制PCR反应液，进行PCR扩增。
　　 结果:
　　 在整体水平，与正常组相比，慢性低剂量辐射可导致小鼠体重增加速率下降，脾脏指数和胸腺指数显著下降，脾脏出现明显的病理性改变。与辐射组相比，香菇多糖组可明显改善上述改变。在细胞水平，与正常组相比，慢性低剂量辐射可导致小鼠T淋巴细胞活性降低，IL-2分泌减少，NO含量升高。与辐射组比较，香菇多糖组T淋巴细胞活性明显增加，IL-2分泌增加，NO含量降低，且与正常组比较，无明显差异。在分子水平，与正常组相比，慢性低剂量辐射可引起Κ+通道Kv1.3、Ca2+通道Orail基因表达出现明显上调。与正常组相比，香菇多糖低剂量组和高剂量组Kv1.3、Orail基因表达无明显差异。与辐射模型组相比，香菇多糖低剂量组Kv1.3基因表达下调、Orail基因表达无显著差异，香菇多糖高剂量组Kv1.3、Orail基因表达均明显下调。
　　 结论:
　　 慢性低剂量辐射可导致小鼠整体及免疫系统功能改变，影响T淋巴细胞功能，引起T淋巴细胞膜上部分离子通道mRNA的表达改变，而香菇多糖可明显干预辐射所致的上述改变。表明，香菇多糖作为一种免疫调节剂，对辐射所致小鼠免疫系统T淋巴细胞损伤具有明显防护作用，而该作用可能与香菇多糖影响T淋巴细胞膜上的离子通道有一定关系。

目录

摘要

引言

第一部分 慢性低剂量辐射应激小鼠模型的验证及LNT的整体干预作用

1．1．实验材料

1．1．1 动物

1．1．2 药物

1．1．3 实验设备

1．2 实验方法

1．2．1 慢性低剂量辐射损伤模型的建立

1．2．2 动物的分组

1．2．3 体重监测和脏器指数测定

1．2．4 脾脏病理切片

1．2．4 统计分析

1．3 实验结果

1．3．1 小鼠体重变化

1．3．2 小鼠脾脏和胸腺指数的变化

1．3．3 病理切片检查结果

1．4 讨论

1．5 结论

第二部分 慢性辐射应激对小鼠T淋巴细胞的作用及LNT的干预作用

2．1 实验材料

2．1．1 动物

2．1．2 分组及处理

2．1．3 药物和试剂

2．1．4 设备

2．2 实验方法

2．2．1 T淋巴细胞的提取

2．2．2 细胞计数

2．2．3 台盘蓝染色检测标记细胞活力

2．2．4 NO含量测定

2．2．5 细胞因子IL-2测定

2．2．6 统计分析

2．3 实验结果

2．3．1 各组小鼠的T淋巴细胞数量与活力检测结果

2．3．2 T淋巴细胞分泌NO含量测定

2．3．3 T淋巴细胞分泌IL-2含量测定

2．4 讨论

2．5 小结

第三部分 慢性辐射应激对小鼠T淋巴细胞膜上离子通道的影响及LNT的干预作用

3．1 实验材料

3．1．1 实验动物与分组

3．1．2 药物和实验试剂

3．1．3 实验设备

3．2 实验方法

3．2．1 T淋巴细胞的提取

3．2．2 RNA提取

3．2．3 cDNA制备

3．2．4 实时荧光定量PCR

3．2．5 统计学分析

3．3 实验结果

3．3．1 ．1 Kv1．3 mRNA表达

3．3．2 KCa3．1mRNA表达情况

3．3．3 Orail基因表达情况

3．3．4 STIM1 mRNA表达情况

3．3．5 TRPM7 mRNA表达情况

3．3．6 ClswellmRNA表达情况

3．4 讨论

3．5 小结

结论

参考文献

综述

攻读学位期间的研究成果

附录

致谢

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