腺相关病毒介导的SOX9和OP1双基因载体联合体内转染兔退变椎间盘的生物学效应

摘要

目的:建立兔椎间盘退变模型;检测腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV）介导的成骨蛋白-1(OP1)和SOX9双基因体内转染对兔退变椎间盘的生物学效应。
　　 方法:成年新西兰大白兔通过针刺纤维环法建立椎间盘退变模型，造模后3周分别进行MRI检测，观察造模椎间盘变化，确认兔退变椎间盘模型造模成功。将造模成功的动物随机分为五组(n=5)，分别A组:双基因组（rAAV2-hSox9+rAAV2-hOp1）B组:OP1组(rAAV2-hOp1)C组:SOX9组(rAAV2-hSox9)D组:EGFP组(rAAV2-EGFP)E组:PBS对照组。分别于造模椎间盘髓核内注射20μ L双基因组混合液（配制比例1∶1）、rAAV-OP1、rAAV-SOX9、rAAV-EGFP、PBS磷酸盐缓冲液，于手术后3、6、9周后行核磁共振扫描观察退变椎间盘变化情况，同时取退变椎间盘组织，RT-PCR方法观察Ⅱ型胶原mRNA及蛋白多糖mRNA的变化。
　　 结果:基因转染后3周、6周、9周时，核磁共振扫描证实A、B、C组与D、E组，退变椎间盘T2加权像的信号强度明显恢复，A组与B组、C组T2加权像的信号强度两两比较显示具有显著统计学意义(P＜0.05);基因转染后3周、6周、9周时，RT-PCR法证实A组、B组、C组在不同转录水平上调了Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA的表达，A组Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达量均高于其他各组，比较差异有统计学意义(P＜0.05);B、C组间Ⅱ型胶原mRNA比较差异无统计学意义(P＞0.05);B、C组间蛋白多糖mRNA比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论:rAAV介导的SOX9及OP-1双基因联合转染对退变椎间盘组织有明显的治疗作用并且可以持续高效表达9周，有效的促进退变椎间盘蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成;双基因治疗椎间盘退变具有协同效用;SOX9基因可以明显提高Ⅱ型胶原mRNA的表达，不能上调蛋白多糖mRNA的表达。

目录

摘要

引言

第一部分 椎间盘退变动物模型的制造

材料和方法

一、材料

二、方法 动物模型的建立

三、观察方法

四、统计学方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二章 SOX9和OP-1单基因或双基因联合转染兔退变椎间盘的生物学效应

材料和方法

一、实验动物与材料

二、手术方法及分组

三、MRI扫描

四、Ⅱ型胶原mRNA及蛋白多糖mRNA表达情况检测

五、统计学法

结果

一、术中及术后动物一般情况观察

二、MRI扫描观察椎间盘改变

三、RT-PCR分析

讨论

结论

参考文献

综述

攻读学位期间的研究成果

附录

致谢

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