胶原相关整合素α1、α2和β1在形觉剥夺性近视诱导及恢复期中调节巩膜重塑作用的研究

摘要

目的：研究豚鼠形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia，FDM）模型中，胶原相关整合素α1、α2和β1在巩膜中的表达情况，探讨其在近视诱导及恢复过程中对巩膜重塑的影响。
　　方法：2~3周龄三色豚鼠160只，分为实验组（n=80）和正常对照组（n=80）。实验组采用头套法遮盖右眼进行形觉剥夺，左眼则为自身对照，正常对照组双眼不予任何处理。实验组依据形觉剥夺l周、2周、4周不同时间建立不同近视诱导和进展过程中的动物模型。并通过对形觉剥夺4周动物去除遮盖物，依据去遮盖时间l天、3天、5天、7天及14天建立不同时间点FDM恢复期的动物模型。在各个时间点对各组动物分别进行检测：带状光检影测量屈光度值；游标卡尺测量眼轴长度；苏木素-伊红（HE）染色观察后极部巩膜组织形态学变化；电镜下观察后极部巩膜超微结构的变化；实时荧光定量聚合酶链反应（QRT-PCR）、免疫组织化学方法检测后极部巩膜胶原相关整合素α1、α2和β1 mRNA及蛋白表达情况。
　　结果：形觉剥夺1周时，实验眼屈光度、眼轴长度与自身对照眼、正常对照眼相比无显著性差异（P>0.05）；形觉剥夺2周、4周后，实验组右眼分别诱导出（-3.00±0.50）D及（-5.50±1.08）D的相对近视，眼轴分别拉长（0.22±0.06）mm及（0.49±0.11）mm，与自身对照组及正常对照组相比，组间差异均有统计学意义（P均<0.05）。去遮盖后，豚鼠右眼重新正视化，与自身对照、正常对照眼相比，去遮盖7天时屈光度差值差异无显著性（P>0.05）；右眼眼轴长度缩短，14天时眼轴长度差值差异无显著性（P>0.05）。巩膜形态学观察见豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜成纤维细胞胞核扭曲变形，巩膜变薄；电镜下胶原纤维排列紊乱，小直径胶原纤维增多。QRT-PCR及免疫组织化学染色显示，实验组右眼形觉剥夺l周、2周、4周后眼球后部巩膜整合素α1、α2和β1 mRNA及蛋白表达明显减少，差异有统计学意义（P<0.05），去遮盖1天后表达开始上调，但仍低于对照组(P<0.05)，7天时与对照组相比较，差异无统计学意义(P>0.05)。自身对照组的上述所有检测指标与正常对照组相比，均无明显差异（P>0.05）。
　　结论：2~3周龄豚鼠去除形觉剥夺后可以重新进行正视化，伴随眼轴长度缩短，去遮盖7天内为眼球生物学参数恢复的主要时期；豚鼠实验性近视发生时巩膜变薄，超微结构发生变化，小直径纤维增多，表明实验性近视眼的形成是巩膜异常重塑的过程；豚鼠后极部巩膜表达整合素α1、α2和β1，豚鼠形觉剥夺诱导期后极部巩膜整合素α1、α2和β1表达减少，去遮盖后表达上调，提示整合素α1、α2和β1可能参与了形觉剥夺性近视的发生，在近视眼发生机制中起了保护作用，其影响巩膜重塑的机制有待进一步研究。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

目录

引言

第一章 实验材料

1.1实验材料

1.2动物形觉剥夺性近视模型的建立

第二章 实验方法

2.1 检测指标与组织标本制作

2.2 巩膜HE形态学观察

2.3 电镜标本制作和巩膜超微结构观察

2.4 免疫组织化学方法检测整合素α1、α2和β1蛋白表达

2.5 实时荧光定量PCR检测整合素α1、α2和β1 mRNA表达

2.6 统计学方法

第三章 实验结果

3.1屈光度、眼轴长度结果

3.2光镜下巩膜的改变

3.3 电镜下巩膜超微结构的改变

3.4 免疫组织化学染色结果

3.5巩膜整合素α1、α2和β1 mRNA的表达变化

第四章 讨论

结论

参考文献

文献综述:近视发病机制研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

声明