TGF-β对肥胖哮喘小鼠气道重塑的影响及吡非尼酮的干预作用

摘要

目的：
　　探讨TGF-β对肥胖哮喘小鼠气道重塑的影响及吡非尼酮干预的作用。
　　方法：
　　将75只健康雌性C57BL/6J小鼠随机均分为：对照组（A组）、肥胖组（B组）、肥胖哮喘组（C组）、布地奈德治疗组（D组）、吡非尼酮治疗组(E组)。肥胖组小鼠均采用高脂饮食诱导肥胖，其中C、D、E组小鼠采用卵白蛋白腹腔注射致敏联合雾化吸入激发的方法构建哮喘模型，对照组小鼠均采用普通饲料饲养，同期给予生理盐水致敏激发。布地奈德治疗组小鼠给予布地奈德悬液雾化吸入（0.5mg/ml，30min/次，qd），吡非尼酮治疗组给以吡非尼酮（300mg/kg）饮水干预，其余组给予正常饮水。治疗4周后，收集小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞计数及分类。采用HE、PAS、Masson染色观察肺组织病理切片的气道炎症、气道重塑及气道粘液分泌情况。采用ELISA法测定血清中转化生长因子β（TGF-β）浓度,取右肺组织用Westernblot检测TGF-β的表达变化情况。应用计算机图像分析软件技术测定气管壁总面积(WAt)、气道平滑肌面积(WAm)和管腔基底膜周长（Pbm）。
　　结果：
　　试验过程中，肥胖组小鼠体质量明显高于空白对照组（P＜0.05）。致敏激发过程中，哮喘各组小鼠均有不同程度的哮喘急性发作表现。至小鼠干预结束时，各组小鼠均无死亡。肥胖哮喘组小鼠BALF中白细胞总数、中性粒细胞及嗜酸性细胞比例均明显高于其余四组；肥胖哮喘小鼠血清、肺组织中TGF-β的水平、气管壁厚度（WAt/Pbm）、平滑肌厚度（WAm/Pbm）均高于对照组、肥胖组、布地奈德治疗组、吡非尼酮干预组。肥胖组BALF白细胞总数、嗜酸性粒细胞比例均略高于对照组，差异无统计学意义（P＞0.05）；吡非尼酮干预组及布地奈德治疗组小鼠BALF的细胞总数、中性粒细胞比例和嗜酸性粒细胞比例较肥胖哮喘组均明显减少（P＜0.05），吡非尼酮干预组BALF中嗜酸性粒细胞比例较布地奈德治疗组减少（P＜0.05），但两组中性粒细胞比例下降不明显（P＞0.05）；吡非尼酮干预组及布地奈德治疗组WAt/Pbm、WAm/Pbm均较肥胖哮喘组明显降低（P＜0.05），吡非尼酮干预组WAt/Pbm较布地奈德治疗组降低（P＜0.05），WAm/Pbm两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；小鼠血清中及肺组织中TGF-β水平按照肥胖哮喘组、布地奈德治疗组、吡非尼酮治疗组、肥胖组、对照组依次递减（P＜0.05），吡非尼酮干预组下降最为明显（P＜0.05）。
　　结论：
　　TGF-β在肥胖哮喘小鼠气道中高表达，其高表达与气道炎症、气道高分泌及气道重塑有密切关系，吡非尼酮能有效抑制气道炎症，达到改善气道炎症及气道重塑的作用。

目录

引言

第一部分 TGF-β对肥胖哮喘小鼠气道炎症及重塑的影响

1 实验材料

1.1. 实验动物

1.2实验主要试剂与耗材

1.3主要仪器

1.4 主要溶液配制

2 实验方法

2.1实验分组及建立饮食诱导的肥胖哮喘模型

2.2 标本的采集及处理

2.3 BALF 白细胞计数和分类

2.4 肺组织病理切片

2.5 血清TGF-β浓度测定

2.6蛋白抽提与Westernblot检测

3统计学处理

4 实验结果

4.1小鼠体质量变化

4.2小鼠一般状况

4.4 气道炎症、黏液分泌及重构情况

4.5 支气管壁重构及炎性评分

4.6小鼠血清TGF-β水平

4.7 Westernblot测定肺组织中TGF-β的表达水平

第二部分 吡非尼酮对肥胖哮喘小鼠气道炎症及重塑的影响

1 实验材料

1.1实验动物

1.2实验试剂与耗材

1.3主要仪器

2 实验方法

2.1实验分组及建立饮食诱导的肥胖哮喘模型 [23，24]

2.2 标本的采集及处理

2.3 BALF白细胞计数和分类

2.4 病理切片

2.5 血清中TGF-β水平检测

2.6 蛋白抽提与Westernblot检测

3 统计学处理

4 实验结果

4.2小鼠一般状况

4.4 气道炎症、黏液分泌及重构情况

4.5 气道重塑情况及炎性评分

4.6各组小鼠血清中TGF-β水平变化

4.7 Westernblot测定肺组织中TGF-β的表达水平

4.8 不良事件

讨论

结论

参考文献

综述：肥胖与哮喘的相关性研究进展

攻读学位期间的研究

附录

致谢

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