染料木黄酮对宿主和HCMV编码的IE基因相关microRNA表达的影响

摘要

目的：⑴应用染料木黄酮（genistein，Gen）作药物，探讨在人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染人星形胶质细胞（human astrocyte，AS）中，Gen对HCMVIE基因的作用及对与主要即刻早期启动子（major immediate early promoter，MIEP）结合的组蛋白H3乙酰化的影响。⑵探讨宿主和HCMV的microRNA（miRNA）在Gen抗HCMV感染AS中的作用。
　　方法：①ASs由人神经干细胞（human neural stem cell，NSC）分化而来，HCMV于人胚肺中（human embryonic lung fibroblast，HELFs）扩增，TCID50法测其滴度。②Cell counting kit-8（CCK-8)实验测不同药物浓度下的细胞活性与细胞毒性，以选出合适的药物浓度。③RT-qPCR测IE1、IE2基因及细胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表达变化。④染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation assay，ChIP）检测与HCMV MIEP结合的组蛋白H3乙酰化的改变。
　　结果：⑴CCK-8结果显示，10μmol/L G+V组的cck-8值均高于同时间组的V组。⑵形态学观察，G组与对照组无明显差别，V组细胞病变明显，V+G组与G+V组的细胞状态相对V组要好，先加药的G+V组的细胞状态相对后加药的V+G组要好。⑶RT-qPCR结果表明，同V组相比，10μmol/L G+V与V+G组会降低IE1、IE2基因的表达。⑷RT-qPCR结果表明，同V组相比，10μmol/L G+V与V+G组能逆转部分hsa-miR-200 miRNA家族及miR-UL112的下降。⑸ChIP结果显示，10μmol/L G+V与V+G组会降低MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化。
　　结论：①10μmol/L的Gen能一定程度抑制HCMV感染AS所致的增殖异常。②Gen能一定程度抑制IE1、IE2基因的表达，降低病毒MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化，并能逆转部分宿主hsa-miR200家族及病毒miR-UL112的下调。Gen可能通过这些作用机理，实现了其抑制病毒IE蛋白的效应。

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引言

第一章 实验材料

1.1 细胞

1.2 病毒

1.3 药物

1.4 实验仪器及设备

1.5 主要实验试剂

1.6 主要试剂配制

第二章 实验方法

2.1 取材与细胞培养

2.2 病毒制备

2.3 实验分组

2.4 CCK-8实验

2.5 RT-qPCR 测 IE1、IE2 基因及细胞 miRNA200 家族、病毒 miR-UL112的表达变化

2.6 ChIP实验

2.7 统计学分析

第三章 结 果

3.1 细胞培养与扩病毒

3.2 CCK-8实验

3.3 形态学观测

3.4 RT-qPCR检测IE1、IE2基因的表达变化

3.5 RT-qPCR检测细胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表达变化

3.6 ChIP实验

第四章 讨 论

参考文献

文献综述:HCMV的microRNA调控

攻读学位期间的研究成果

致谢

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