转录因子YinYang-1在组蛋白的去乙酰化酶抑制剂对原发性肝细胞癌抑制作用中的研究

摘要

目的:组蛋白的去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylase inhibitor，HDACi)是一类新型具有研发潜力的抗肿瘤药物，能够通过使抑癌基因显著增多的表达、诱导恶性肿瘤细胞的凋亡和阻断肿瘤生长(血管生成)来治疗恶性肿瘤。其对肝癌的抑制作用已被证实。本研究主要探讨转录因子YinYang-1(YY1)在组蛋白的去乙酰化酶抑制剂对原发性肝细胞癌治疗中的价值。
　　方法：使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒测定不同剂量药物处理组和对照组计算出10种肝癌（癌旁）细胞系的IC50;通过对不同细胞系对药物的反应使用聚类分析法对肝癌细胞系进行药物敏感性分类;绘制相同药物剂量下各时间段药物处理组和对照组肝癌细胞生长曲线。利用实时荧光定量PCR和western blot技术研究不同药物敏感组肝癌细胞基因表达，结果考虑转录因子YY1的表达量高低可能是影响肝癌细胞对组蛋白的去乙酰化酶抑制剂敏感性的原因之一，最后采用基因敲除和过表达的方法分析验证转录因子YY1在组蛋白的去乙酰化酶抑制剂对肝癌细胞抑制中作用。
　　结果：使用不同浓度组蛋白的去乙酰化酶抑制剂SAHA及TSA对10种肝癌（癌旁）细胞系进行处理通过CCK-8法测得IC50(加药后凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度)，通过聚类分析，可将这些细胞系分为高剂量敏感组及低剂量敏感组，同时对两组细胞使用同相药物剂量处理其生长曲线也存在差异（P＜0.05）。对两组细胞中组蛋白的去乙酰化酶抑制剂主要靶基因也是在癌症相关基因的表达过程中起重要作用的组蛋白去乙酰化酶1/2/3(HDAC1/2/3)及转录因子YY1表达量进行分析，高剂量敏感组的HDAC1与YY1要高于低剂量敏感组细胞,差异有统计学意义(P＜0.05）且转录因子YY1和HDAC1表达成正相关，并在肝癌组织标本中进行了验证。敲除和过表达YY1后，HDAC1表达量也相应升高和降低。对高剂量敏感的SMMC7721细胞敲除YY1后检测到其对组蛋白的去乙酰化酶抑制剂的敏感性增高；对低剂量敏感的HEPG2细胞过表达YY1基因后其对组蛋白的去乙酰化酶抑制剂表现出耐药性增高。
　　结论：不同肝癌细胞系对组蛋白的去乙酰化酶抑制剂敏感性存在差异。转录因子YY1能够调控组蛋白去乙酰化酶1的表达，从而影响肝癌细胞组蛋白的去乙酰化酶抑制剂的敏感性。本研究表明转录因子YY1可作为一种新的生物学标记物预测肝癌患者对组蛋白的去乙酰化酶抑制剂治疗是否有效，为个体化精准治疗恶性肿瘤提供了新的思路；也为联合应用抗转录因子YY1和组蛋白的去乙酰化酶抑制剂以提高肝癌患者对药物的敏感性增加疗效，提供了实验和理论基础。

目录

引言

第一章 材料与方法

1.1.主要设备仪器

1.2.主要实验材料

1.3主要实验方法

第二章 结果

2.1HDACi对肝癌(癌旁)细胞系的抑制作用

2.2组蛋白的去乙酰化酶抑制剂主要靶基因HDAC1/2/3及转录因子YY1表达量分析

2.3转录因子YY1影响HDAC1的表达

2.4转录因子YY1在HDACi对肝癌细胞抑制效应中的作用

第三章 讨论

参考文献

综述:组蛋白的去乙酰化酶抑制剂的抗恶性肿瘤相关研究

攻读学位期间的研究成果

致谢

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