狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞生物学特性的影响

摘要

目的：通过体外培养人皮肤成纤维细胞，观察狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对其生物学性状的影响。
　　方法：人皮肤成纤维细胞通过体外培养，培养液中加入不同浓度的胶原蛋白肽，分为实验对照组和空白对照组，使用酶标法检测狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对成纤维细胞增殖的影响、使用Annexin V/PI双染法检测狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对成纤维细胞凋亡的影响；使用Elisa试剂盒检测狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对成纤维细胞分泌TGF-β1、SOD等指标的表达变化；使用Western blot法检测I型胶原蛋白的表达；使用划痕实验法检测胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞迁移率的影响。
　　结果：1.细胞增殖：不同浓度的胶原蛋白肽处理人皮肤成纤维细胞48h后，通过CCK-8试剂盒检测胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞增殖的作用。结果显示经胶原蛋白肽刺激后，成纤维细胞增殖速度呈现剂量依赖效应，随着胶原蛋白肽浓度的增高，细胞的增殖速度也加快，与空白对照组相比具有显著性差异（P＜0.05）。在胶原蛋白肽浓度为25mg/ml的条件下，成纤维细胞增殖速度最快。2.细胞凋亡：25mg/ml胶原蛋白肽处理24h后，我们通过Annexin-v-FITC/PI试剂盒检测了胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞凋亡的影响。经胶原蛋白肽处理后，相比空白对照组，成纤维细胞的凋亡比率显著下降（P＜0.05）胶原蛋白肽可有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖，抑制细胞凋亡，并可显著提高成纤维细胞分泌TGF-β1、SOD等活性因子的含量(t=4.07，F=774.23、2100.63，P＜0.05)。与空白对照组相比，胶原蛋白肽组细胞迁移能力增强（P＜0.05）3.Elisa实验结果：经不同浓度胶原蛋白肽刺激后，结果显示TGF-β1和SOD表达均升高，并呈剂量依赖性，25mg/ml及50mg/ml的浓度较空白对照组差异均具有极其显著性差异（P＜0.01），其中，以50mg/ml作用最为显著。4.划痕实验：结果显示，经过胶原蛋白肽作用后的细胞迁移率显著提高（P＜0.01)。5.Western blot实验：结果显示，经过胶原蛋白肽作用后的人皮肤成纤维细胞I型胶原蛋白的表达量提高（P＜0.05）。
　　结论：狭鳕鱼皮胶原蛋白肽能促进成纤维细胞的增殖，提高人皮肤成纤维细胞存活率，以胶原蛋白浓度为25mg/ml时作用最为显著，并能抑制细胞的凋亡。狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对TGF-βI、SOD的分泌表达具有显著的促进作用，并呈剂量依赖性。狭鳕鱼皮胶原蛋白肽能促进人皮肤成纤维细胞的迁移，促进I型胶原蛋白合成可能在创伤愈合中发挥重要作用。

目录

引言

材料与方法

1 实验细胞

2 实验用品与试剂

3 主要仪器

4 细胞培养

5 CCK-8法检测细胞增殖

6 Annexin-v-FITC/PI检测细胞凋亡率

7 Elisa检测 SOD、TGF-β1的表达

8划痕实验法检测细胞迁移率

9 Western Blot检测I型胶原蛋白的表达

10统计学处理

结果

1狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞增殖的促进作用

2胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞凋亡的抑制作用

3胶原蛋白肽对促进成纤维细胞分泌TGF-β1和SOD的作用

4胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞迁移率的作用

5胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞I型胶原蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

综述:鱼胶原蛋白肽作为组成工程支架材料的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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