LHA-伏隔核Orexin-A通路对葡萄糖敏感神经元放电活动和胃运动调控研究

摘要

目的：阐明下丘脑外侧核（LHA）-伏隔核（NAcc）orexin-A神经和功能通路构成，探讨该通路对大鼠葡萄糖敏感神经元（GS）放电活动和胃运动的影响及潜在机制。
　　方法：健康成年雄性Wistar大鼠随机分为三部分：第一部分大鼠采用逆行追踪技术结合免疫荧光组织化学染色法，观察下丘脑外侧核-伏隔核间是否存在orexin-A神经通路；第二部分大鼠采用单细胞外记录放电活动，鉴定伏隔核葡萄糖敏感神经元，并且观察伏隔核内微量注射orexin-A对葡萄糖敏感神经元放电活动的影响，以及电刺激下丘脑外侧核后，伏隔核内orexin-A反应性葡萄糖敏感神经元放电活动的变化；第三部分大鼠通过在体胃运动研究，观察伏隔核内微量注射不同浓度orexin-A对大鼠胃运动幅度和频率的影响，以及电刺激下丘脑外侧核后，大鼠胃运动的变化及机制。
　　结果：逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色发现，下丘脑外侧核内有荧光金和orexin-A双重标记的神经元。电生理研究显示，在伏隔核内共记录到62个葡萄糖敏感型神经元（GS），其中有42个GS呈现兴奋效应（GS-E），20个GS呈现抑制效应（GS-I）。伏隔核微量注射ore xin-A，在这42个GS-E中，有30个神经元（30/42，71.43%）放电频率显著升高（P＜0.05），10个神经元（10/42，23.81%）放电频率显著降低（P＜0.05）。在20个GS-I中，伏隔核微量注射o re xin-A，其中有15个神经元（15/20，75%）放电活动呈现兴奋效应（P＜0.05），有4个神经元（4/20，20%）放电活动呈现抑制效应（P＜0.05）。伏隔核预先注射orexin-A受体拮抗剂SB-334867，orexin-A对葡萄糖敏感神经元的兴奋或抑制作用则被完全阻断（P＞0.05）。电刺激下丘脑外侧核，在伏隔核记录到的39个orexin-A反应性GS-E神经元中，有28个神经元（28/39,71.79%）进一步呈现兴奋效应（P＜0.05），7个神经元（7/39，17.94%）放电活动呈现抑制状态（P＜0.05）；在伏隔核记录到的20个ore xin-A反应性 GS-I神经元，其中有14个神经元（14/20，70%）放电频率显著升高（P＜0.05），4个神经元(20.0%)放电活动显著减弱（P＜0.05）。伏隔核预先注射SB-334867，再电刺激下丘脑外侧核，伏隔核内ore xin-A反应性葡萄糖敏感神经元的放电频率均显著下降(P＜0.05)。胃运动研究结果显示，伏隔核内微量注射orexin-A，大鼠胃运动幅度和频率显著增加，并呈现显著剂量依赖关系（P＜0.05），伏隔核预先微量注射SB-334867，可反转该效应（P＜0.05）。电刺激下丘脑外侧核，大鼠胃运动幅度和频率显著增强（P＜0.05）。同样，伏隔核内微量注射SB-334867，再电刺激下丘脑外侧核，电刺激导致的胃运动增强效应显著减弱（P＜0.05）。
　　结论：下丘脑外侧核→伏隔核存在orexin-A神经和功能通路，该通路可能参与胃动力和能量代谢调控。

目录

引言

材料和方法

1.1 实验动物

1.2 实验仪器

1.3 实验药品

1.4试剂配制

2 实验方法

2.1 逆行追踪和免疫组织化学染色实验

2.2 电生理实验

2.3 胃运动实验

2.4 电刺激实验

2.5 组织学检查

3 统计学分析

实验结果

1 下丘脑外侧核-伏隔核orexin-A神经纤维投射

2电生理实验

2.1 Orexin-A对伏隔核葡萄糖敏感神经元放电活动的影响

2. 2电刺激下丘脑外侧核对伏隔核orexin-A反应性葡萄糖敏感神经元放电活动的影响

3胃运动实验

3. 1伏隔核微量注射orexin-A对大鼠胃运动的影响

3. 2 伏隔核微量注射SB-334867对电刺激下丘脑外侧核诱导的大鼠胃运动的影响

讨论

结论

参考文献

综述:Orexins与动机行为摄食

攻读学位期间研究成果

致谢

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