Mincle对真菌性角膜炎中性粒细胞凋亡的调控作用

摘要

目的：研究巨噬细胞诱导c型凝集素（Macrophage inducible C-type lectin，Mincle）在真菌性角膜炎中对中性粒细胞凋亡的调控作用。
　　方法：随机将健康的C57BL/6小鼠分为对照组和烟曲霉菌角膜炎组，分别于建模后12小时、1天、3天、5天裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜感染情况，收集全角膜，检测Mincle的表达情况。用Mincle激动剂TDB以及Mincle中和抗体球结膜下注射预处理后，然后在烟曲霉菌感染小鼠角膜1天及3天，观察小鼠角膜感染情况，收集全角膜，qRT-PCR法检测小鼠角膜中Mincle、FAS、FASL和Caspase3 mRNA的表达，免疫荧光检测小鼠角膜中性粒细胞的浸润和细胞凋亡情况。从小鼠腹腔中提取中性粒细胞，并用烟曲霉菌刺激4小时、8小时、12小时、16小时，qRT-PCR法检测中性粒细胞中Mincle mRNA的表达。TDB和Mincle的中和抗体预处理小鼠腹腔中性粒细胞2小时，然后用灭活的烟曲霉菌刺激中性粒细胞8小时，qRT- PCR法检测FAS、FASL、Caspase3 mRNA的表达，Western blot检测Caspase3的蛋白表达,流式细胞仪检测炎症因子和中性粒细胞的凋亡情况。
　　结果：灭活的烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠12小时、1天、3天、5天后角膜中Mincle的mRNA和蛋白比正常对照组中的表达高，在12小时Mincle的mRNA表达最高。TDB处理组和DMSO处理组相比，TDB组Mincle的mRNA表达增多。TDB预处理组烟曲霉菌感染小鼠角膜1天后，Fas、Fasl和Caspase3的mRNA水平与单纯的烟曲霉菌刺激相比显著降低；IgG预处理组烟曲霉菌感染1天后Fas、Fasl和Caspase3的mRNA水平与Mincle中和抗体预处理组相比显著降低。TDB处理组和DMSO处理组相比，Mincle的蛋白表达升高，TUNEL染色阳性细胞数减少，中性粒细胞数目增多。TDB预处理组烟曲霉菌感染小鼠角膜3天与单纯的烟曲霉菌刺激相比，Fas、Fasl和Caspase3的蛋白水平显著降低，TUNEL染色阳性细胞数减少，而中性粒细胞数目是增多的；IgG预处理组烟曲霉菌感染3天与Mincle中和抗体预处理组烟曲霉菌感染3天相比Fas、Fasl和Caspase3的蛋白水平显著降低，TUNEL染色阳性细胞数减少，而中性粒细胞数目是增多的。灭活的烟曲霉菌刺激中性粒细胞4小时、8小时、12小时、16小时后Mincle的mRNA和蛋白比正常对照组中的表达高，在8小时Mincle的mRNA表达水平最高。TDB处理组和DMSO处理组相比，TDB组Mincle的mRNA表达增多。TDB预处理组烟曲霉菌刺激小鼠中性粒细胞8小时后，Fas、Fasl和Caspase3的mRNA和蛋白表达水平与单纯的烟曲霉菌刺激相比显著降低，中性粒细胞凋亡率下降；IgG预处理组烟曲霉菌刺激8小时后Fas、Fasl和Caspase3的mRNA和蛋白表达水平与Mincle中和抗体预处理组相比显著降低，中性粒细胞的凋亡率下降。
　　结论：Mincle参与烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应过程，真菌感染后Mincle的表达上调同时中性粒细胞的浸润水平和凋亡数目也是增加的。Mincle还可以通过抑制FAS和FASL的结合来抑制Caspase3的表达进而抑制嗜中性粒细胞凋亡。

目录

引言

材料和方法

1．实验材料

2试验方法

3数据分析

结果

1 C57BL/6小鼠角膜中的Mincle表达和嗜中性粒细胞浸润

2 Mincle对烟曲霉菌诱导小鼠模型角膜炎症细胞凋亡的影响

3 Mincle对C57BL/6小鼠中性粒细胞的影响

讨论

结论

参考文献

综述:C型凝集素受体在固有免疫中的功能研究

附录

致谢

声明