三氧化二砷对人子宫肉瘤MES-SA细胞系裸鼠皮下移植瘤的作用研究

摘要

目的：采用体内实验研究的方法，选用人子宫肉瘤MES-SA细胞系，建立人子宫肉瘤裸鼠皮下移植瘤模型，研究三氧化二砷（Arsenic Trioxide，As2O3）对人子宫肉瘤细胞系（MES-SA）是否具有抗肿瘤作用并初步研究其可能机制。
　　方法：人子宫肉瘤细胞株MES-SA在含体积分数0.10标准胎牛血清的RPM I-1640培养液中进行细胞培养，并获取单细胞悬液；实验动物为40只4-6周龄的裸鼠，MES-SA单细胞悬液皮下注入裸鼠体内，产生瘤结节，建立人子宫肉瘤细胞裸鼠皮下移植瘤模型。随机分为5组：As2O3低、中、高剂量组(剂量分别为1.0、2.5、5.0mg/kg)、生理盐水（NS）空白对照组、异环磷酰胺(IFO)阳性对照组，每组8只，连续10天腹腔注射相应药物，观察裸鼠一般情况及瘤结节生长情况。停药后处死裸鼠剥离瘤组织，检测以下指标：称瘤质量并计算抑瘤率；流式细胞仪检测细胞凋亡率；提取瘤组织中RNA，采用荧光标记的特异性Taq探针法，进行PCR反应，测定CT值，进行半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)基因表达的相对定量分析，检测并比较caspase-3基因表达；制备肿瘤组织石蜡切片，进行p-ERK抗体免疫组化染色，观察着色情况，测定p-ERK表达（免疫组化SP法）。进行数据处理及统计学分析。
　　结果：1.一般情况：所有裸鼠均有瘤结节长出，成功建立移植瘤模型。用药后各As2O3组裸鼠一般状态良好，精神饮食可、大小便正常、正常活动、生长良好、无明显消瘦，与NS组差别不大；IFO阳性对照组裸鼠用药后一般状态不佳，出现坐立不安等疑似腹膜刺激症状，且精神差，饮食少，反应迟钝，活动少，并有腹泻，消瘦等。
　　2.移植瘤质量及抑瘤率：三组As2O3组及IFO组的瘤质量均小于NS组瘤质量，差异均有统计学意义，（P＜0.05）；As2O3高剂量组及IFO组瘤质量最低，较其他组有显著差异（P＜0.05）；As2O3高剂量组与IFO组瘤质量差别不大，As2O3中、低剂量组差别也不明显。结果提示As2O3有抑制肿瘤作用，且高剂量As2O3与IFO有相似的抑瘤作用，抑瘤作用最强。
　　3.凋亡率：三组As2O3组及IFO组均有典型凋亡峰出现；与NS组相比，As2O3组及IFO组凋亡率均升高；且As2O3组凋亡率高于IFO组（P＜0.05）。As2O3组凋亡率随剂量增加而升高，中、低剂量组差别不明显(P＞0.05)，高剂量组凋亡率高于中、低剂量组。可见As2O3能促进细胞凋亡，且高剂量As2O3组促凋亡作用最明显。
　　4.caspase-3基因表达：各 As2O3组 caspase-3基因表达高于 NS组及 IFO组（P＜0.05)，提示As2O3可上调caspase-3基因表达；高剂量As2O3组表达高于中、低剂量组，但差异无统计学意义（P=0.192）。
　　5.p-ERK表达：各剂量As2O3组及IFO组p-ERK的表达均低于NS组，但无显著差异；高剂量As2O3组p-ERK表达率最低，NS组最高，高剂量As2O3组显著低于NS组(Z=-2.063，P=0.039＜0.05)。提示As2O3可下调p-ERK的表达，且高剂量组作用最明显。
　　结论：1.As2O3对人子宫肉瘤裸鼠皮下移植瘤增殖发挥出较好的抑制生长作用，能诱导肿瘤细胞凋亡；As2O3可上调Caspase-3、下调p-ERK基因的表达；促凋亡可能与上调Caspase-3基因表达有关，抑瘤作用还可能与下调p-ERK表达影响ERK-MAPK信号传导通路有关。2.与IFO相比，As2O3不良反应相对较小，耐受可，相对安全有效，有望应用于除白血病外的多种实体瘤的治疗，为肿瘤的治疗带来新的希望。

目录

引言

材料与方法

1材料

2方法

3 统计处理

结果

1裸鼠一般情况

2 As2O3对裸鼠移植瘤的抑瘤作用

3 As2O3在移植瘤细胞凋亡中的作用

4caspase-3 基因表达

5各组p-ERK的表达

讨论

结论

参考文献

综述:三氧化二砷对子宫肉瘤的作用

攻读学位期间的研究成果

致谢

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