与2型糖尿病相关的肥胖机制研究及药物治疗新靶点-MGAT的探讨

摘要

糖尿病是以胰岛素抵抗和/或胰岛素分泌不足为特点的代谢综合症,临床主要表现为高血糖.2型糖尿病约占糖尿病总数的90％,其发病率在全球逐年增长.2型糖尿病的发病机制虽然尚不十分清楚,但肥胖被认为是主要诱因,如何改善肥胖是治疗2型糖尿病的研究方向之一.该实验的目的是探讨肥胖产生的机制,寻找肥胖的致病因素,以此作为治疗肥胖和2型糖尿病的新靶点.实验使用的动物为OLETF和LETO大鼠.OLETF大鼠是自然发病的肥胖型2型糖尿病模型动物,由日本大塚制药株式会社开发.它的发病过程及病理特征与人类2型糖尿病极为相似,因此该模型动物对研究肥胖和2型糖尿病的发病机制以及新药的开发是非常有价值的工具.LETO大鼠是同一近交系由来的完全不发病动物,用作正常对照.考察PVDF膜与底物结合的稳定性;设计不同阴性对照,分析膜上发生的反应.结果表明,在一定浓度表面活性剂的存在下,底物与膜仍可稳定结合.反应限定在膜上发生,膜上生成的产物可以被检测和定量.进一步的实验考察反应时间、酶蛋白量和底物浓度对反应的影响,确定最适反应条件,建立MGAT活性测定法.将确立的方法应用于目标化合物的筛选,得到的化合物BOF可以剂量依赖性地抑制MGAT的活性,具有进一步研究和开发的价值.应用PVDF膜印迹法测定MGAT活性的方法,准确、简便和高效,具备筛选化合物的能力,国内外均未见文献报道.期待这个新方法能对脂质研究技术和酶活性测定方法的开发提供一种新思路.

目录

摘要

ABSTRACT

序言

第一部分限食对肥胖和糖尿病的改善作用

前言

实验材料

实验方法

1.限食方法的确立及动物分组

2.限食对肥胖的改善作用

3.限食对糖尿病的改善作用

4.数据统计处理方法

实验结果

1.限食方法的确立

2.限食方法对肥胖的改善作用

3.限食对糖尿病的改善作用

讨论

小结

第二部分导致肥胖产生原因的探讨

前言

实验材料

实验方法

1.肝素注射后血浆中LPL活性的测定

2.MGAT和DGAT活性的测定

3.数据处理统计方法

实验结果

1.肝素注射后血浆中脂蛋白脂肪酶的活性

2.组织中MGAT和DGAT活性的测定

讨论

小结

第三部分一种新型MGAT活性测定方法的确立

前言

实验材料

实验方法

1.小肠微粒体酶的制备

2.反应体系的建立

3.反应体系中各因素对反应的影响

4.MGAT抑制剂的筛选

5.统计学处理方法

实验结果

2.反应体系的建立

3.反应体系中各因素对反应的影响

4.MGAT抑制剂的筛选

讨论

小结

结论

参考文献

致谢

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