特异结合APP上a分泌酶酶切位点单链抗体的筛选及其特性研究

摘要

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease，AD)是一种渐进性的中枢神经退行性疾病，临床症状包括记忆缺失、短时程记忆损伤、认知能力下降、行为异常和语言能力障碍等，主要病理特征为细胞外老年斑(senile plaque)、细胞内神经元纤维缠结与选择性神经元及突触丢失等。其中，老年斑主要成分是一种称为β淀粉样蛋白(βamyloid，Aβ)的肽类物质，由淀粉样前体蛋白(amyloid precursorprotein，APP)在病理状态下，经β分泌酶、γ分泌酶系列水解而产生，其可自发形成对细胞具有毒性的聚集物，导致患者脑功能障碍。在生理状态下，APP主要通过α分泌酶水解产生可溶性分泌型氨基末端多肽片段sAPPα及含83个氨基酸残基的羧基端跨膜片段C83。其中sAPPα对神经细胞具有营养和保护作用，参与调节突触的可塑性，并能在一定程度上抑制Aβ的生成，因此这条代谢途径已成为AD治疗研究的靶点。α分泌酶是由一系列的多功能同功酶组成，其对APP的酶切作用机理及与AD发生发展的关系啄待大量的研究讨论。而目前国际上尚无有效抑制α分泌酶对APP酶切作用的抑制剂。
　　 本课题以含有α分泌酶酶切位点的六肽为抗原，利用人源性单链抗体库，在国际上首次筛选出了能够特异结合APP上α分泌酶酶切位点的scFv(single chain variable fragment，单链可变区抗体)。实验结果表明，筛选所得的4株阳性克隆抗体均含有935bp的抗体基因片段。DNA测序结果显示，4株阳性克隆均含有scFv的VH与VL的DNA序列，其相应的特异单链抗体氮基酸序列具有人抗体重链和轻链可变区的典型特征，均含有预计的高变区和框架区氮基酸序列。选取其中一株scFv(Z1)经ELISA、Dot-Blot、Western-Blot等实验均表明筛选得到的scFv可与含有α分泌酶酶切位点的六肽呈现抗原-抗体反应，也能与含有α分泌酶酶切位点的Aβ特异性结合。上述结果表明，筛选获得的scFv能与α分泌酶的酶切底物APP结合，可作为α分泌酶酶切反应抑制剂为AD发病机理的研究探讨提供一种实验材料。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

第一章引 言

1.1研究目的和意义

1.2课题相关内容及其研究进展

1.2.1 AD症病因的研究进展

1.2.2 AD症治疗的研究进展

1.2.3 α分泌酶研究进展

1.2.4噬菌体展示技术研究进展

第二章　特异结合APP上α分泌酶酶切位点单链抗体的筛选及其特性研究

2.1材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4讨论

2.5 小结

第三章结论

参考文献

致谢

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